【摘 要】
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目的:构建含有人磷脂酰肌醇3-激酶p1 10γ(phosphatidylinositol 3-kinase,catalytic subunit gamma,PI3KCG)基因的慢病毒载体,鉴定其在乳大鼠原代心肌细胞中的表达并作初步
【机 构】
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南京医科大学第一附属医院心脏科,江苏南京,210029;南京医科大学第一附属医院老年科,江苏南京,210029;南京医科大学医药动物实验基地,江苏南京,210029
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目的:构建含有人磷脂酰肌醇3-激酶p1 10γ(phosphatidylinositol 3-kinase,catalytic subunit gamma,PI3KCG)基因的慢病毒载体,鉴定其在乳大鼠原代心肌细胞中的表达并作初步功能检测.方法:利用同源重组的方法构建含PI3KCG基因慢病毒载体质粒,测序鉴定后采用脂质体转染法同慢病毒系统三质粒共转染293T细胞,转染后24h和48 h荧光显微镜下观察阳性对照组中的绿色荧光蛋白的表达,同时PCR法鉴定重组PI3KCG慢病毒质粒转染293T细胞成功,收集72 h病毒上清.培养乳大鼠原代心肌细胞,分为对照组,缺氧/复氧组,空载体阳性对照组,PI3KCG实验组,PI3KCG+Ly294002组5组,将含PI3KCG慢病毒载体的病毒液转染心肌细胞,检测各组的细胞培养上清中的乳酸脱氢酶浓度,观察预转染PI3KCG基因对心肌细胞缺氧/复氧过程中的保护作用.结果:成功构建含有PI3KCG基因的慢病毒载体质粒,并在293T细胞中成功表达.与缺氧/复氧组比较,PI3KCG组心肌细胞培养液中乳酸脱氢酶水平明显降低(P＜0.01)；心肌细胞的存活率、搏动频率明显升高(P＜0.01).结论:PI3KCG慢病毒载体有望成为探讨PI3K/AKT信号通路激活在防止心肌细胞缺血再灌注损伤的有效工具.
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