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目的 构建慢病毒介导的具有特定二级结构的人microRNA-338-3p (miR-338-3p)抑制剂并观察其对结直肠癌细胞侵袭转移能力的影响.方法 由miRBase数据库查找获得miR-338-3p成熟序列,设计目的基因片段并人工合成；将miR-338-3p抑制剂序列和pLV-THM载体经双酶切后连接,产生pLV-THM-miR-338-3p抑制剂慢病毒表达载体,双酶切后测序鉴定,筛选阳性克隆；以pLV-THM-miR-338-3p抑制剂、psPAX2和pMD2.G质粒共转染包装细胞293T,包装产生慢病毒并测定滴度.流式细胞仪筛选建立稳定过表达miR-338-3p抑制剂的SW-620亚细胞株,利用实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-338-3p表达,Western blot检测其靶基因Smoothened (SMO)蛋白表达水平,Transwell小室穿透试验检测肿瘤细胞转移能力.结果 经双酶切鉴定和测序证实,成功构建了包含miR-338-3p抑制剂的慢病毒表达载体,倒置荧光显微镜下观察可见包装细胞293T表达绿色荧光.稳定过表达miR-338-3p抑制剂的SW-620亚细胞株中,miR-338-3p表达水平显著低于阴性对照组(0.92±0.43比3.71 ±0.22,P＜0.01),SMO蛋白表达水平明显升高,且肿瘤细胞表现出侵袭转移能力的增强(细胞数78.6±6.9比23.7±4.2,P＜0.01).结论 成功构建了miR-338-3p抑制剂的慢病毒表达载体和稳定低表达miR-338-3p的SW-620亚细胞株,证实miR-338-3p可通过抑制结直肠癌细胞中SMO蛋白表达而抑制肿瘤细胞转移。