优化Wnt5A特异性siRNA转染原代人黑素细胞的实验条件，建立沉默Wnt5A基因的模型。
方法培养原代人黑素细胞，将不同浓度（0、20.0、33.3、40.0、60.0 nmol/L）的阳性参照基因GAPDH特异性siRNA通过脂质体法介导转染原代人黑素细胞，实时荧光定量PCR（qPCR）筛选转染效率最高的siRNA浓度；合成3条Wnt5A-siRNA（Wnt5A-siRNA-793、Wnt5A-siRNA-943、Wnt5A-siRNA-1743），分别转染原代人表皮黑素细胞，qPCR法选择干扰特异性最佳的Wnt5A-siRNA；用最佳Wnt5A-siRNA转染原代人黑素细胞，分别于培养24、48、72 h提取总mRNA及总蛋白，通过qPCR及Western印迹法确定转染效率最高的时间点。
结果0、20.0、33.3、40.0、60.0 nmol/L GAPDH-siRNA转染原代人黑素细胞后，GAPDH mRNA相对表达量分别为1.009 ± 0.161、0.086 ± 0.010、0.140 ± 0.016、0.285 ± 0.095、0.012 ± 0.007，组间比较，差异有统计学意义（F= 69.469，P < 0.05）。60 nmol/L siRNA组GAPDH表达低于其他各组（均P < 0.05），干扰效率最佳；各Wnt5A-siRNA组及空白组Wnt5A mRNA相对表达量分别为0.331 ± 0.010、2.229 ± 0.029、0.078 ± 0.006、1.000 ± 0.024，差异有统计学意义（F= 7 006.094，P < 0.05）。Wnt5A-siRNA-1743组目标分子表达量低于其他3组（均P < 0.05），干扰效率最佳。Wnt5A-siRNA-1743转染原代人表皮黑素细胞后24、48、72 h及空白组Wnt5A mRNA相对表达量分别为0.396 ± 0.002、0.026 ± 0.008、0.131 ± 0.079、1.025 ± 0.276，组间比较，差异有统计学意义（F= 29.215，P <0.05），干扰后48 h低于干扰后24、72 h及空白组（均P < 0.05）；Wnt5A蛋白相对表达量分别为112.798 ± 0.218、77.765 ± 0.415、30.540 ± 0.219、130.025 ± 0.158，组间比较，差异有统计学意义（F= 79 122.889，P < 0.05），干扰后72 h低于干扰后24、48 h及空白组（均P < 0.05）。
结论成功建立siRNA沉默人黑素细胞Wnt5A基因的模型。