【摘 要】
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利用稳定过表达人类T型钙通道αqG亚单位的HEK-293细胞研究了T型钙通道在细胞增殖中的作用.RT-PCR和标准全细胞膜片钳记录分别从mRNA转录水平和T型钙通道蛋白功能水平验证了
【机 构】
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湖南师范大学生命科学学院蛋白质化学及发育生物学教育部重点实验室,英国雷丁大学微生物及动物学系
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利用稳定过表达人类T型钙通道αqG亚单位的HEK-293细胞研究了T型钙通道在细胞增殖中的作用.RT-PCR和标准全细胞膜片钳记录分别从mRNA转录水平和T型钙通道蛋白功能水平验证了α1G亚单位的过表达的实现.生长曲线表明,T型钙通道α1G亚单位的过表达能显著促进细胞增殖,HEKα1G+细胞的细胞群体倍增时间(13.7±0.3h)比对照HEK-293细胞的细胞群体倍增时间(22.1±1.1h)缩短了约8h;流式细胞分析结果也与此吻合,在稳定过表达了人类T型钙通道α1G亚单位的细胞处于S期的细胞百分率比对照HEK-293细胞高,相反地处于G0/G1期的百分率比对照HEK-293细胞低,以上结果证明过表达T型钙通道αqG亚单位能促进细胞增殖;T型钙通道特异性阻断剂mibefradil抑制HEKα1G+细胞增殖,IC50为3.5μmol/L,表明在HEK-293细胞过表达T型钙通道对细胞增殖的促进作用可以被T型钙通道特异性阻断剂mibefradil抑制,这就进一步证明了T型钙通道在促进细胞增殖方面的直接作用.Western杂交结果提示了T型钙通道α1G亚单位的表达是通过某种信号途径提高了与细胞周期有关的蛋白质,cyclin A、cyclin E和CDK2的表达水平,从而刺激了细胞周期的进程.本研究有助于理解细胞增殖的机制并为开发治疗与细胞增殖异常有关疾病的新药提供了理论依据.
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