【摘 要】
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目的 构建原核表达载体pET15b-PEP-1-SOD1,观察表达的融合蛋白PEP-1-SOD1能否转导入人脐静脉内皮细胞,以及转导的PEP-1-SOD1融合蛋白能否减轻人脐静脉内皮细胞的缺氧/复氧损
【机 构】
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郧阳医学院附属人民医院临床医学研究所
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目的 构建原核表达载体pET15b-PEP-1-SOD1,观察表达的融合蛋白PEP-1-SOD1能否转导入人脐静脉内皮细胞,以及转导的PEP-1-SOD1融合蛋白能否减轻人脐静脉内皮细胞的缺氧/复氧损伤.方法 构建原核表达载体pET15b-SOD1和pET15b-PEP-1-SOD1,分别转化基因工程菌BL21(DE3),表达出N端带有6个组氨酸"标签"的SOD1和PEP-1-SOD1融合蛋白.将纯化后的融合蛋白加入体外培养的人脐静脉内皮细胞,观察这种融合蛋白的转导能力及其在细胞内的活性.采用体外培养的人脐静脉内皮细胞建立缺氧/复氧损伤模型,检测不同浓度的PEP-1-SOD1对氧化应激损伤的人脐静脉内皮细胞的生存率、乳酸脱氢酶和丙二醛含量的影响.结果 PEP-1-SOD1融合蛋白能高效地转导人体外培养的人脐静脉内皮细胞,并表现出剂量依赖性和时间依赖性的特点,2μmol/L PEP-1-SOD1-30 min组SOD1酶活性为(60.88±6.73)U/ml,显著高于对照组酶活性(41.06±4.19)U/ml,P＜0.01,转导入细胞内的PEP-1-SOD1融合蛋白的活性可以维持至24h.PEP-1-SOD1各浓度组均提高缺氧/复氧人脐静脉内皮细胞的生存率,减少乳酸脱氢酶的释放量,降低丙二醛含量.结论 PEP-1-SOD1融合蛋白能直接以天然有活性的形式转导入人脐静脉内皮细胞内,且能明显减轻人脐静脉内皮细胞的缺氧/复氧损伤.这种蛋白转导方式,为用SOD1防止在体缺血/再灌注损伤的研究奠定了基础.
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