【摘 要】
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目的表达和纯化肠道病毒71型(EV71)3C蛋白酶并通过与抑制剂相互作用预测其活性位点。方法将3C蛋白酶片段克隆至pET-28a原核表达载体,重组质粒导入大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱
【机 构】
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湖北工业大学生物工程与食品学院发酵工程湖北省协同创新中心,
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目的表达和纯化肠道病毒71型(EV71)3C蛋白酶并通过与抑制剂相互作用预测其活性位点。方法将3C蛋白酶片段克隆至pET-28a原核表达载体,重组质粒导入大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,获得3C蛋白酶融合蛋白,经Ni-NTA柱亲和纯化后以荧光多肽为底物检测3C蛋白酶的活性。使用AutoDock模拟3C蛋白酶与芦丁(Rutin)和芦平曲韦(Lupintrivir)对接。结果经酶切、PCR、测序证明pET28a-3C重组质粒构建成功,表达产物分子质量约23×10~3,纯化的3C蛋白酶酶活较好;对接结果表明Rutin和Rupintrivir通过形成氢键网和疏水键与3C蛋白酶底物结合位点结合,结合的活性氨基酸残基有His161、Gly163、Gly164、Phe170。结论成功制备了具有生物学活性的高纯度EV71 3C蛋白酶,建立了预测能力较好的对接模型,为以3C蛋白酶为靶点的药物设计和筛选奠定了基础。
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