【摘 要】
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<正> Ⅱ型限制性核酸内切酶(以下简称限制酶)是一类水解DNA的磷酸二酯酶.因为它能识别特定碱基序列并能在特异位点切割DNA,在分子生物学、遗传工程等研究中已成为一种极有用
【机 构】
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塔里木农垦大学生物基础部; 塔里木农垦大学生物基础部 新疆阿拉尔843300; 新疆阿拉尔843300; 新疆阿拉尔843300;
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<正> Ⅱ型限制性核酸内切酶(以下简称限制酶)是一类水解DNA的磷酸二酯酶.因为它能识别特定碱基序列并能在特异位点切割DNA,在分子生物学、遗传工程等研究中已成为一种极有用的工具酶.本文就其提纯方法和它的性质作了较详细的说明.1 Ⅱ型限制性核酸内切酶的提纯1.1Ⅱ型限制性核酸内切酶的提取Ⅱ型限制酶是在深入研究噬菌体和寄主关系这样一个生物学问题时发现的.Arber根据细菌中存在限制——修饰现象于1965年预言有限制酶存在.1968年Meseson等人从大肠杆菌K株分离到第一个限制酶ECOK,1970年Smith等人从流感嗜血杆菌Rd株分离到第一个Ⅱ型限制酶HindⅠ,Nathans等人立即查明了Ⅱ型限制酶的有效性,以此新的Ⅱ型限制酶的发现如雨后春笋.然而这些限制酶均来源于原核生物.Ⅱ型限制酶提取的一般步骤为:将来源不同的菌株经活化后,接种于培养基中,摇床振荡过夜,经通氧培养,对数后期离心收集菌体,可用不同浓度的Tris—HCI缓冲液化洗涤菌体,可收集到湿菌,再将湿菌悬浮于KPB(即磷酸缓冲液)中加溶菌酶,或用超声波破碎细胞,经高速离心若干时间后取上清液,即得酶的粗堤液.
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