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目的：建立生物样品中甲氨喋呤（ＭＴＸ）浓度测定方法。方法：固相萃取净化和富集样品，高效液相色谱法测定血清和脑脊液中ＭＴＸ含量。色谱条件：以Ｃ１８柱为分析柱，流动相为甲醇－乙腈－磷酸盐缓冲液（２：７：９１），流带０．８ｍＬ．ｍｉｎ＾－１，柱温２５℃，检测波长３１３ｎｍ。结果：在０．０５￣８０μｇ．ｍＬ＾－１范围内呈线性，回收率为９０％以上，血清中ＭＴＸ最低检测限为１０ｎｇ．ｍＬ＾－１，脑脊液中最低检