【摘 要】
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由小鼠骨组织提取总RNA,采用RT-PCR扩增得到小鼠核因子κB受体活化因子配基(RANKL)活性区域cDNA.将该cDNA片段克隆入表达载体pPIC9,重组载体转化巴斯德毕赤酵母GS115细胞,筛
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由小鼠骨组织提取总RNA,采用RT-PCR扩增得到小鼠核因子κB受体活化因子配基(RANKL)活性区域cDNA.将该cDNA片段克隆入表达载体pPIC9,重组载体转化巴斯德毕赤酵母GS115细胞,筛选Mut+表型,经甲醇诱导实现目的基因的分泌型表达.Tricine-SDS-PAGE显示,表达产物约26 kD,经Western印迹鉴定,表达产物可被RANKL抗体识别.采用硫酸铵盐析、CM-Sephadex C-25层析纯化重组蛋白.经测定,发酵液上清重组蛋白表达量约11 mg/L.采用破骨细胞样细胞(osteoclast like cell, OLC)诱导分化实验检测重组蛋白的生物活性,证实该重组蛋白可以促进OLC的生成,并呈现剂量依赖关系.
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