【摘 要】
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[目的]水稻OsFAD2编码脂肪酸脱饱和酶,调节油酸(C18:1)向亚油酸(C18:2)转化,该基因突变后可提高水稻的油酸含量.为了创制高油酸水稻突变体并助力稻米油发展,利用CRISPR/Cas9技术对OsFAD2进行定点编辑.[方法]以日本晴(粳稻)愈伤组织为材料,利用含有CRISPR/Cas9-FAD2-sgRNA载体的农杆菌介导获得转基因植株,Sanger测序与荧光定量PCR鉴定阳性植株,最后利用气相色谱质谱(GC-MS)检测稻米籽粒脂肪酸含量变化.[结果]靶点序列测序检测表明,有3株OsFAD2敲
【机 构】
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安徽袁粮水稻产业有限公司,安徽 芜湖 241003;广东省农业科学院作物研究所/广东省农作物遗传改良重点实验室,广东 广州 510640
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[目的]水稻OsFAD2编码脂肪酸脱饱和酶,调节油酸(C18:1)向亚油酸(C18:2)转化,该基因突变后可提高水稻的油酸含量.为了创制高油酸水稻突变体并助力稻米油发展,利用CRISPR/Cas9技术对OsFAD2进行定点编辑.[方法]以日本晴(粳稻)愈伤组织为材料,利用含有CRISPR/Cas9-FAD2-sgRNA载体的农杆菌介导获得转基因植株,Sanger测序与荧光定量PCR鉴定阳性植株,最后利用气相色谱质谱(GC-MS)检测稻米籽粒脂肪酸含量变化.[结果]靶点序列测序检测表明,有3株OsFAD2敲除植株在T0代产生了碱基变异,但是仅有1株不存在脱靶现象.随后阳性植株种子被扩繁至T1代,使得OsFAD2突变序列纯和、稳定,荧光定量PCR检测表明OsFAD2表达量比野生型植株显著减少.利用T1代转基因植株进行种子脂肪酸组分检测表明,敲除OsFAD2导致籽粒油酸含量显著上升约30％.[结论]利用CRISPR/Cas9技术对水稻OsFAD2编码区序列进行靶向敲除并获得了高油酸水稻突变体,为后续高油酸稻米育种提供种质资源.
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