广州管圆线虫GAMMA—BBH基因的克隆表达鉴定和荧光定量检测

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目的亚克隆和表达广州管圆线虫γ-丁基甜菜碱羟化酶(γ-butyrobetaine hydroxylase,GAMMA-BBH)基因.对该蛋白属性进行鉴定,定量检测不同虫龄该目的基因表达量。方法PCR扩增GAMMA—BBH cDNA基因.产物经Nco Ⅰ和HindⅢ限制性内切酶酶切后连接至原核表达载体重组为pET—BBH,在B121(DE3)中用IPTG诱导表达.SDS—PAGE、Westernblot和酶活性测定鉴定表达产物,用荧光定量PCR方法检测广州管圆线虫不同虫龄GAMMA—BBH的表达量。结果PC
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