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目的 :获得重组ESAT6蛋白 ,研究其免疫学特性 ,评价其在结核病血清学诊断中的价值。方法 :分别用生理盐水和卡介苗免疫小鼠 8周后 ,以结核分支杆菌接种小鼠。应用基因工程技术表达、纯化ESAT6蛋白 ,分别以结核分支杆菌PPD或纯化的rESAT6蛋白为抗原 ,通过ELISA方法及结核病一步法检测小鼠或人血清中抗结核抗体。结果 :重组质粒 pET2 4b -ESAT6在大肠杆菌BL2 (DE3)细胞内以包涵体形式存在 ,分子量约6kDa ,每 10 0ml培养菌可获得约 18mg纯化的重组蛋白。生理盐水和卡介苗免疫小鼠血后血清中抗ESAT6抗体无区别 ;结核分支杆菌攻击后 ,两组小鼠血清中抗ESAT6抗体均明显升高 ,但只有卡介苗组小鼠抗体水平超过平均值 +2标准误。以 33例正常人血清的OD值 +2S为正常界限值 ,33例正常人和 32例结核病人血清一步法和PDD、rESAT6ELISA检测抗结核抗体的特异性和敏感性分别为 :一步法 87.9% (2 9/33)、6 5 .6 %(2 1/32 ) ;PPD 93 .9% (31/33)、6 2 .5 % (2 0 /32 ) ;rESAT6 97% (32 /33)、18.2 % (4/32 )。结论 :pET2 4b -ESAT6大肠杆菌工程菌能以包涵形式高效表达重组ESAT6蛋白 ,卡介苗免疫对血清中抗ESAT6抗体无影响 ,结核病人血清中抗ESAT6抗体阳性率低 ,rESAT6纯化蛋白可作为结核病血清学诊断的混合抗原之一。