【摘 要】
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为了在毕赤酵母表达系统中分泌表达人骨保护素(osteoprotegerin,OPG),以人骨肉瘤细胞系MG63的mRNA为模板,采用RT-PCR法得到人OPG编码区cDNA,克隆入毕赤酵母表达载体pPICZ-B,
【机 构】
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西京医院全军骨科研究所,第四军医大学,唐都医院骨科
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为了在毕赤酵母表达系统中分泌表达人骨保护素(osteoprotegerin,OPG),以人骨肉瘤细胞系MG63的mRNA为模板,采用RT-PCR法得到人OPG编码区cDNA,克隆入毕赤酵母表达载体pPICZ-B,电转化毕赤酵母GS115(Mut+),经3%甲醇诱导分泌表达人OPG与组氨酸的融合蛋白.SDS-PAGE及Western印迹分析表明,有分子量约66 kD的目的蛋白表达.纯化后的表达产物加入体外培养的小鼠骨髓细胞培养基中,当浓度为100 ng/ml时,象牙片上骨吸收陷窝的数量及玻片上的TRAP阳性
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