目的改良肝星状细胞(HSC)的分离方法,为深入研究肝纤维化的发生机制奠定基础。方法采用Ⅳ型胶原酶和链酶蛋白酶原位消化肝脏,在1.040～1.060 g/mL范围内多重多次密度梯度离心分离HSC,台盼蓝染色测定细胞存活率,328 nm紫外光激发HSC自发蓝绿色荧光法和Desmin细胞免疫荧光法鉴定HSC及检测HSC纯度。Desmin和α-SMA细胞免疫荧光方法鉴定HSC静息和活化状态。结果每只大鼠肝脏HSC得率为(3～5)×107个,HSC存活率在95%以上,纯度在90%以上,体外培养14 d后活化的HSC纯度几乎达100%。结论在1.040～1.060 g/mL密度范围内采用多重多次密度梯度离心方法,避免了HSC分离过程中因密度配比误差及HSC自身密度相对不均一性所导致的细胞流失,建立了一种改良的肝星状细胞分离方法,HSC得率和纯度更加稳定,达到国外文献报道水平。