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[摘要]目的探讨支气管肺泡灌洗液半乳甘露聚糖檢测在侵袭性肺曲霉病（ IPA）患者诊断价值。方法选取我院2016年7月- 2018年6月收治的80例怀疑IPA患者作为病例组，以非IPA患者50例作为对照组。观察两组患者BALF-GM和血清GM结果，观察BALF-GM和血清GM检测诊断价值情况，观察BALF-GM和血清GM检测IPA的ROC曲线分析情况。结果病例组BALF-GM和血清GM结果均高于对照组，在Cutoff值为0.5、1.0、1.5、2.0，BALF-GM测定敏感性均高于血清GM，差异均有统计学意义（P<0.05）。BALF-GM和血清GM检测IPA的ROC曲线下面积0.803（ 95%CI： 0.706 - 0.874）、0.612（ 95%%CI 0.490 - 0.718），最佳cut off值0.643、0.426，其敏感性分别为74.9%和47.4%、84.O%和86.1%、78.3%和80.3%、78.3%和68.2%。结论BALF-GM在诊断非免疫功能低下的IPA敏感性高于血清GM，其最佳cut off值0.643，可以用于IPA辅助诊断。
[关键词]支气管肺泡灌洗;半乳甘露聚糖;侵袭性肺曲霉病;诊断;敏感性;特异性
[中图分类号] R563.9
[文献标识码]A
[文章编号]2095-0616（ 2019） 01-183-04
侵袭性肺曲霉病（IPA）的临床表现不是十分典型，其需要采用胸部的CT、痰涂片、培养、血清的半乳甘露聚糖（GM）检测、肺组织活检等，但是其诊断过程比较困难，如果诊断延误可能影响了临床治疗效果，预后效果较差，只有进行及早的、准确的诊断，才可以改善患者的预后[1-2]。一般情况下，IPA会侵犯患者的肺，对于已经感染的肺，进行支气管肺泡灌洗（ BAIF），然后在进行GM检测，从而提高IPA诊断效率[3-4]。本文通过对我院2016年7月- 2018年6月收治的80例怀疑IPA患者临床资料进行分析，拟探讨支气管肺泡灌洗液CM检测在IPA患者诊断价值情况，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取我院2016年7月- 2018年6月收治的80例怀疑IPA患者作为病例组，其中男43例，女37例，年龄21 - 67岁，平均（45.3±10.7）岁，均采用支气管肺泡灌洗（ BAIF），对患者的灌洗液进行GM检测，并且对患者的血清CM检测结果、影像学检查结果和痰涂片、痰培养结果进行分析，将80例患者分为确诊IPA 48例，临床诊断IPA 22例，拟诊IPA 10例，纳入标准：参照中国侵袭性肺部真菌性感染诊断标准进行确诊，患者有发热症状，通过广谱抗生素连续治疗3d无明显效果，同时进行胸部影像学检查和血液标本GM检查;排除标准：粒细胞缺乏、器官或者是造血干细胞移植患者;恶性血液系统疾病、恶性肿瘤患者;以非IPA组50例作为对照组，其中男31例，女19例，年龄23 - 68岁，平均（ 48.5±11.8）岁，纳入标准：患者有发热症状，广谱抗生素治疗2 - 3d的临床效果不理想;排除标准：IPA其他类型的感染患者。本研究在我院伦理委员会批准下进行，两组患者在知情同意的情况下参与本研究，一般资料差异无统计学意义（P>0.05）。具有可比性。
1.2 仪器与方法
1.2.1 主要试剂及仪器曲霉菌半乳甘露聚糖检测采用酶联免疫吸附试验（ELISA法）、TECANSUNRISE酶标仪（TECAN公司生产），湘仪TG16-WS台式高速离心机（湖南湘仪实验室仪器开发有限公司），奥盛K30干式恒温器（杭州奥盛仪器有限公司），XW-80A型旋涡混合器（上海医科大学仪器厂）。
1.2.2 血清GM检测 采集患者空腹静脉血3 - 5mL，3000r/min离心lOmin，对血清进行分离，按曲霉菌半乳甘露聚糖检测试剂盒（ELISA法）说明书进行测定，将300μL血清+100μL样本处理液，将其充分的混匀，以旋涡震荡lOs，保持沸水浴3min，采集上清液进行检测。分别设立阴性对照、阳性对照、cut off值对照，其中cutoff值对照的吸光度值范围是0.3 - 0.8，阳性对照A值/cut off值对照A值>1.5，阴性对照A值/cut off值对照A值<0.4，样本A指数=样本A值/cutoff值对照A值的均值。
1.2.3 BALF GM检测 由临床医师按纤维支气管镜常规操作进行，采集肺泡灌洗液5 - lOmL，保存到无菌密封容器中。肺泡灌洗液采集后在800 - lOOOrmp下离心5min，取上清液用于GM检测。检测步骤同血清标本。 1.3 观察指标
（1）观察两组患者BALF-GM和血清GM结果情况;（2）观察BALF-GM和血清GM检测诊断价值情况;（3）观察BALF-GM和血清GM检测IPA的ROC曲线分析情况
1.4 统计学分析
采用统计学软件SPSS22.0对数据进行统计分析，计量资料以（n±s）表示，采用t检验，计数资料以[n（%）]表示，采用X2检验，构建ROC曲线进行分析。P< 0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 两组患者BALF-GM和血清GM结果比较
病例组BALF-GM和血清GM结果均高于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。见表1。
2.2 BALF-GM和血清GM检测诊断价值比较
在Cut off值为0.5、1.0、1.5、2.0，BALF-GM测定敏感性均高于血清GM，差异均有统计学意义（X2=22.818、54.667、49.034、34.352，P<0.05）。见表2。
2.3 BALF-GM和血清GM检测IPA的ROC曲线分析情况 BALF-GM和血清GM检测IPA的ROC曲线下面积0.803（ 95%CI： 0.706-0.874 ）、0.612（ 95%CI：0.490-0.718），最佳cut off值0.643 、0.426，其敏感性分別为74.9%和47.4%、84.0%和86.1%、78.3%和80.3% 、78.3%和68.2%。见表3、图1。
3 讨论
GM作为曲霉菌属细胞壁主要由多糖组成，其在生长过程中，逐步的释放到BALF和血液之中[5-6]。BALF主要来自于受到肺曲霉影响的靶器官，其对于IPA有很高的诊断敏感性[7-8]。有很多研究表明，血清或者是BALF中GM，主要是在诊断中性粒细胞减少和血液系统疾病患者的IPA发挥作用，但是其在非免疫功能低下、非血液系统疾病患者的诊断价值没有明确的报道[9-10]。血清中GM水平和真菌负荷、患者机体免疫功能有一定的相关性[11-12]。IPA早期血液中释放GM的水平相对较低，并且在免疫功能正常的宿主之中，中性粒细胞可以促进GM清除率增加[13-14]。病例组BALF-GM和血清GM结果均高于对照组，提示肺是受到损伤的靶器官，肺部曲霉局部的负荷量要明显高于其他的体液，因而可以推论，在诊断IPA过程中，BALF-GM检测要比血清GM更加敏感[15-16]。
本研究还分别选取了4个cut off值，即0.5、1.0、1.5、2.0，BALF-GM测定敏感性均高于血清GM，BALF-CM和血清GM检测IPA过程中，最佳cut off值0.643、0.426，提示对于非免疫功能低下的患者，BALF-GM可以明显的提高IPA诊断敏感性。
综上所述，BALF-GM在诊断非免疫功能低下的IPA敏感性高于血清GM，其最佳诊断cut off值0.643，可以用于IPA辅助诊断。
[参考文献]
[1]张成飞，翟甜甜，张岩钊，等.血清半乳甘露聚糖试验对非粒细胞缺乏患者侵袭性肺曲霉病的诊断价值评估及影响因素分析[J].中华医院感染学杂志，2018，28（9）：1284-1287.1295.
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[11] Aquino VR， Nagel F， Andreolla HF， et aI.Theperformance of real-time PCR， galactomannan， andfungal culture in the diagnosis of invasive aspergillosisin ventilated patients with chronic obstructive pulmonarydisease（ COPD）[J].Myco pathologia， 2012， 174（2）：163-169.
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[13]王建友，周阿旺，陈丹.半乳甘露聚糖在COPD患者侵袭性肺曲霉病的诊断价值[J].中国卫生检验杂志，2014，24（4）：540-542.
[14] Okaturlar Y， Ozkalemkas F，Ener B， et aI.Serumgalactomannan levels in the diagnosis of invasiveaspergillosis[J].J Intem Med， 2015， 30（6）：899-905.
[15]高伟，周明锦，陈楠.血清半乳甘露聚糖检测对儿童侵袭性肺曲霉病早期诊断的价值[J].江苏医药，2014，40（7）：847-848.
[16]刘亚迪，朱骏，杨一宁，等.GM抗原检测对血液病患者侵袭性曲霉病的诊断价值[J].现代生物医学进展， 2014，14（ 32）：6315-6320.
[关键词]支气管肺泡灌洗;半乳甘露聚糖;侵袭性肺曲霉病;诊断;敏感性;特异性
[中图分类号] R563.9
[文献标识码]A
[文章编号]2095-0616（ 2019） 01-183-04
侵袭性肺曲霉病（IPA）的临床表现不是十分典型，其需要采用胸部的CT、痰涂片、培养、血清的半乳甘露聚糖（GM）检测、肺组织活检等，但是其诊断过程比较困难，如果诊断延误可能影响了临床治疗效果，预后效果较差，只有进行及早的、准确的诊断，才可以改善患者的预后[1-2]。一般情况下，IPA会侵犯患者的肺，对于已经感染的肺，进行支气管肺泡灌洗（ BAIF），然后在进行GM检测，从而提高IPA诊断效率[3-4]。本文通过对我院2016年7月- 2018年6月收治的80例怀疑IPA患者临床资料进行分析，拟探讨支气管肺泡灌洗液CM检测在IPA患者诊断价值情况，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取我院2016年7月- 2018年6月收治的80例怀疑IPA患者作为病例组，其中男43例，女37例，年龄21 - 67岁，平均（45.3±10.7）岁，均采用支气管肺泡灌洗（ BAIF），对患者的灌洗液进行GM检测，并且对患者的血清CM检测结果、影像学检查结果和痰涂片、痰培养结果进行分析，将80例患者分为确诊IPA 48例，临床诊断IPA 22例，拟诊IPA 10例，纳入标准：参照中国侵袭性肺部真菌性感染诊断标准进行确诊，患者有发热症状，通过广谱抗生素连续治疗3d无明显效果，同时进行胸部影像学检查和血液标本GM检查;排除标准：粒细胞缺乏、器官或者是造血干细胞移植患者;恶性血液系统疾病、恶性肿瘤患者;以非IPA组50例作为对照组，其中男31例，女19例，年龄23 - 68岁，平均（ 48.5±11.8）岁，纳入标准：患者有发热症状，广谱抗生素治疗2 - 3d的临床效果不理想;排除标准：IPA其他类型的感染患者。本研究在我院伦理委员会批准下进行，两组患者在知情同意的情况下参与本研究，一般资料差异无统计学意义（P>0.05）。具有可比性。
1.2 仪器与方法
1.2.1 主要试剂及仪器曲霉菌半乳甘露聚糖检测采用酶联免疫吸附试验（ELISA法）、TECANSUNRISE酶标仪（TECAN公司生产），湘仪TG16-WS台式高速离心机（湖南湘仪实验室仪器开发有限公司），奥盛K30干式恒温器（杭州奥盛仪器有限公司），XW-80A型旋涡混合器（上海医科大学仪器厂）。
1.2.2 血清GM检测 采集患者空腹静脉血3 - 5mL，3000r/min离心lOmin，对血清进行分离，按曲霉菌半乳甘露聚糖检测试剂盒（ELISA法）说明书进行测定，将300μL血清+100μL样本处理液，将其充分的混匀，以旋涡震荡lOs，保持沸水浴3min，采集上清液进行检测。分别设立阴性对照、阳性对照、cut off值对照，其中cutoff值对照的吸光度值范围是0.3 - 0.8，阳性对照A值/cut off值对照A值>1.5，阴性对照A值/cut off值对照A值<0.4，样本A指数=样本A值/cutoff值对照A值的均值。
1.2.3 BALF GM检测 由临床医师按纤维支气管镜常规操作进行，采集肺泡灌洗液5 - lOmL，保存到无菌密封容器中。肺泡灌洗液采集后在800 - lOOOrmp下离心5min，取上清液用于GM检测。检测步骤同血清标本。 1.3 观察指标
（1）观察两组患者BALF-GM和血清GM结果情况;（2）观察BALF-GM和血清GM检测诊断价值情况;（3）观察BALF-GM和血清GM检测IPA的ROC曲线分析情况
1.4 统计学分析
采用统计学软件SPSS22.0对数据进行统计分析，计量资料以（n±s）表示，采用t检验，计数资料以[n（%）]表示，采用X2检验，构建ROC曲线进行分析。P< 0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 两组患者BALF-GM和血清GM结果比较
病例组BALF-GM和血清GM结果均高于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。见表1。
2.2 BALF-GM和血清GM检测诊断价值比较
在Cut off值为0.5、1.0、1.5、2.0，BALF-GM测定敏感性均高于血清GM，差异均有统计学意义（X2=22.818、54.667、49.034、34.352，P<0.05）。见表2。
2.3 BALF-GM和血清GM检测IPA的ROC曲线分析情况 BALF-GM和血清GM检测IPA的ROC曲线下面积0.803（ 95%CI： 0.706-0.874 ）、0.612（ 95%CI：0.490-0.718），最佳cut off值0.643 、0.426，其敏感性分別为74.9%和47.4%、84.0%和86.1%、78.3%和80.3% 、78.3%和68.2%。见表3、图1。
3 讨论
GM作为曲霉菌属细胞壁主要由多糖组成，其在生长过程中，逐步的释放到BALF和血液之中[5-6]。BALF主要来自于受到肺曲霉影响的靶器官，其对于IPA有很高的诊断敏感性[7-8]。有很多研究表明，血清或者是BALF中GM，主要是在诊断中性粒细胞减少和血液系统疾病患者的IPA发挥作用，但是其在非免疫功能低下、非血液系统疾病患者的诊断价值没有明确的报道[9-10]。血清中GM水平和真菌负荷、患者机体免疫功能有一定的相关性[11-12]。IPA早期血液中释放GM的水平相对较低，并且在免疫功能正常的宿主之中，中性粒细胞可以促进GM清除率增加[13-14]。病例组BALF-GM和血清GM结果均高于对照组，提示肺是受到损伤的靶器官，肺部曲霉局部的负荷量要明显高于其他的体液，因而可以推论，在诊断IPA过程中，BALF-GM检测要比血清GM更加敏感[15-16]。
本研究还分别选取了4个cut off值，即0.5、1.0、1.5、2.0，BALF-GM测定敏感性均高于血清GM，BALF-CM和血清GM检测IPA过程中，最佳cut off值0.643、0.426，提示对于非免疫功能低下的患者，BALF-GM可以明显的提高IPA诊断敏感性。
综上所述，BALF-GM在诊断非免疫功能低下的IPA敏感性高于血清GM，其最佳诊断cut off值0.643，可以用于IPA辅助诊断。
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[1]张成飞，翟甜甜，张岩钊，等.血清半乳甘露聚糖试验对非粒细胞缺乏患者侵袭性肺曲霉病的诊断价值评估及影响因素分析[J].中华医院感染学杂志，2018，28（9）：1284-1287.1295.
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[14] Okaturlar Y， Ozkalemkas F，Ener B， et aI.Serumgalactomannan levels in the diagnosis of invasiveaspergillosis[J].J Intem Med， 2015， 30（6）：899-905.
[15]高伟，周明锦，陈楠.血清半乳甘露聚糖检测对儿童侵袭性肺曲霉病早期诊断的价值[J].江苏医药，2014，40（7）：847-848.
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