【摘 要】
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目的 建立一种基于DNA扩增和测序分型(PCR sequencing-based typing,PCR-SBT)的人类血小板抗原HPA-1～HPA-16w的基因分型方法.方法 从免疫多态性数据库中下载HPA-1～HPA-16w的全
【机 构】
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浙江省血液中心输血研究所卫生部血液安全研究重点实验室
【基金项目】
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浙江省医药卫生优秀青年科技人才专项科研基金;
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目的 建立一种基于DNA扩增和测序分型(PCR sequencing-based typing,PCR-SBT)的人类血小板抗原HPA-1～HPA-16w的基因分型方法.方法 从免疫多态性数据库中下载HPA-1～HPA-16w的全套HPA核酸序列,以Primer Premier 5.0软件设计引物,特异性扩增包含HPA-1a/lb到HPA-16aw/16bw多态性的核酸片段.通过调整引物序列和PCR条件获得单一的特异性扩增产物.PCR产物纯化后直接进行DNA序列分析并确定HPA基因型.通过对2份标准样本的HPA分型验证PCR-SBT方法的准确性;并利用PCR-SBT法对2008年度国际输血协会(ISBT)第14届国际血小板免疫学工作组提供的16份比对样本(包括6个含有基因突变的干扰样本)进行HPA基因分型.结果 设计11对引物扩增和测序16个HPA系统.2份标准样本的HPA基因型分别为HPA:1aa/2aa/3ab/4aa/5ab/6aa/7aa/8aa/9aa/10aa/11aa/12aa/13aa/14aa/15aa/16aa和HPA:1aa/2aa/3aa/4aa/5aa/6aa/7aa/8aa/9aa/10aa/11aa/12aa/13aa/14aa/15as/16an.16份ISBT考核样本的256个HPA基因型结果清晰,其中HPA-1～HPA-6w、HPA-9w和HPA-15共8个系统的128个基因型结果与ISBT参考结果完全一致.结论 建立了HPA-1～HPA-16w的PCR-SBT分型方法,结合高通量的DNA序列分析仪,具有简单、快速和准确的优点,适合于临床HPA全套基因分型,具有良好的应用前景.
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