【摘 要】
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目的:构建骨形态发生蛋白(BMP)2与BMP7嵌合表达的分泌型基因载体pcDNA3-BMP2/7,检测表达产物的成骨诱导活性。方法:聚合酶链反应(PCR)扩增BMP2与BMP7的成熟肽编码基因,利用重
【机 构】
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天津医科大学代谢病医院内分泌研究所、卫生部激素与发育重点实验室
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目(项目编号:30300171);天津市自然科学基金重点项目(项目编号:07JCZDJC07500);天津市高等学校科技发展基金(项目编号:20060207)
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目的:构建骨形态发生蛋白(BMP)2与BMP7嵌合表达的分泌型基因载体pcDNA3-BMP2/7,检测表达产物的成骨诱导活性。方法:聚合酶链反应(PCR)扩增BMP2与BMP7的成熟肽编码基因,利用重叠延伸PCR以柔性肽(Gly4Ser)3编码序列使两者嵌合并克隆到质粒pcDNA3/sec上,转染CHO-K1细胞筛选得到稳定克隆,以其条件培养基处理鼠胚胎成纤维细胞C3H10T1/2,通过RT-PCR研究BMP2/7嵌合表达产物的活性。结果:BMP2/7嵌合表达产物可以明显提高C3H10T1/2细胞碱性磷酸酶(Alkalinephos phatase,ALP)、骨钙素(Osteocalcin,Oc)成骨细胞表型基因以及特异性转录因子Runx2(runt-related transcription factor2)mRNA的表达(P<0.01)。结论:制备的BMP2/7嵌合表达产物能够形成异源二聚体,诱导非骨源性细胞向成骨细胞分化。
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