【摘 要】
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目的探讨高糖诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)上皮-间充质细胞转分化过程中Klotho/FGFR1/FGF2信号转导途径的表达及肾元颗粒含药血清的干预作用。方法 30只Wistar大鼠采用随机数
【机 构】
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湖北中医药大学中医临床学院; 襄阳市中心医院中医科湖北文理学院附属医院; 湖北省中医院肾内科;
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目(No.81573907)
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目的探讨高糖诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)上皮-间充质细胞转分化过程中Klotho/FGFR1/FGF2信号转导途径的表达及肾元颗粒含药血清的干预作用。方法 30只Wistar大鼠采用随机数字表法分为空白组、肾元颗粒组及厄贝沙坦组,每组10只,灌胃7天后门静脉取血。采用CCK-8法测定细胞增殖率以确定大鼠血清加入浓度,以LDH法检测含药血清对HK-2细胞的毒性作用。以高糖(30 mmol/L)诱导HK-2细胞上皮-间充质细胞转分化建立模型,分为正常组、模型组、高渗对照组、肾元颗粒组、厄贝沙坦组及ERK阻断剂组。免疫荧光检测Klotho及FGF2的表达,Western blot及RT-PCR检测Klotho、FGF2、ECadherin、α-SMA、FN、CollgenⅣ蛋白及m RNA表达水平,Western blot分析各组细胞ERK及磷酸化ERK(p-ERK)水平。结果 CCK-8法结果显示大鼠空白血清培养HK-2细胞最佳浓度为20%。LDH结果显示,与10%胎牛血清比较,肾元颗粒含药血清、厄贝沙坦含药血清对细胞LDH活性的影响差异无统计学意义(P> 0. 05)。与正常组比较,模型组Klotho、E-Cadherin蛋白及m RNA表达降低(P <0. 05),FGF2、α-SMA、FN、CollgenⅣ蛋白及m RNA表达增高(P <0. 05),p-ERK水平显著增高(P <0. 05)。与模型组比较,肾元颗粒组Klotho、E-Cadherin蛋白及m RNA表达显著增高(P <0. 05),FGF2、α-SMA、FN、CollgenⅣ蛋白及m RNA表达显著降低(P <0. 05),p-ERK水平显著降低(P <0. 05)。结论肾元颗粒含药血清能改善高糖诱导的人肾小管上皮细胞转分化,其作用机制可能与调节Klotho/FGFR1/FGF2信号通路有关。
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