【摘 要】
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通过提高枯草芽孢杆菌来源的氨肽酶底物结合区域氨基酸的疏水性,提高氨肽酶YwaD的热稳定性.基于氨肽酶底物结合区域氨基酸特性分析,选定亲水性氨基酸残基N385为目标,通过定点
【机 构】
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江南大学生物工程学院,江苏无锡214122;江南大学工业生物技术教育部重点实验室,江苏无锡21412
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通过提高枯草芽孢杆菌来源的氨肽酶底物结合区域氨基酸的疏水性,提高氨肽酶YwaD的热稳定性.基于氨肽酶底物结合区域氨基酸特性分析,选定亲水性氨基酸残基N385为目标,通过定点突变使其突变为疏水氨基酸残基L385,获得突变体N385L.结果 表明,与野生型ywaD相比,突变体N385L酶热稳定性明显提高,在80℃放置30 min,野生型YwaD完全失活,而突变体N385L仍保留20％的酶活力.另外,突变型N385L对底物氨基酰基-硝基苯胺的亲和力提高了47.4％,催化效率提高了28.5％.该研究有利于提高氨基肽酶工业应用前景.
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