【摘 要】
：
目的 介绍一种胱硫醚-γ-裂解酶(Cystathionine-γ-lyase,CSE)基因敲除小鼠基因型的鉴定方法.方法 提取3只野生型(Wild type,WT)小鼠(CSE+/+)和21只杂合子小鼠(CSE+/-)繁殖的子代小鼠的鼠尾基因组DNA,以其为模板,聚合酶链反应(Polymerase chain reaction,PCR)扩增后凝胶电泳;然后分别提取3只WT小鼠和6只随机选择的CSE基因敲除小鼠(CSE-/-)肠道组织和骨髓来源的巨噬细胞(Bone marrow-derived macrop
【机 构】
：
遵义医科大学 基础医学院免疫学教研室,贵州 遵义 563099;遵义医科大学 公共卫生学院流行病与卫生统计学教研室 贵州 遵义 563099
论文部分内容阅读
目的 介绍一种胱硫醚-γ-裂解酶(Cystathionine-γ-lyase,CSE)基因敲除小鼠基因型的鉴定方法.方法 提取3只野生型(Wild type,WT)小鼠(CSE+/+)和21只杂合子小鼠(CSE+/-)繁殖的子代小鼠的鼠尾基因组DNA,以其为模板,聚合酶链反应(Polymerase chain reaction,PCR)扩增后凝胶电泳;然后分别提取3只WT小鼠和6只随机选择的CSE基因敲除小鼠(CSE-/-)肠道组织和骨髓来源的巨噬细胞(Bone marrow-derived macrophage,BMDM)蛋白,并用免疫印迹法(Western blot)检测其中CSE蛋白的表达.结果 凝胶电泳结果显示:只在167 bp处有表达的是WT鼠或CSE+/+小鼠;在167 bp处、309 bp处均有表达的是CSE+/-小鼠;只在309 bp处有表达的是CSE-/-小鼠.Western blot检测结果表明,与野生鼠相比,CSE-/-小鼠肠道组织和BMDM中CSE蛋白表达显著性降低(P<0.01),与凝胶电泳实验结果一致.结论 采用PCR结合凝胶电泳的方法鉴定CSE基因敲除小鼠的基因型是一种较为准确的鉴定方法,此方法可以为使用该动物的实验研究节约经济成本和时间成本.
其他文献
目的 研究敲减LMNA基因(编码lamin A/C)对肾癌细胞786-O的基因表达谱的影响,从而探讨LMNA在肾癌发生发展中的分子机制.方法 在完全培养基RPMI 1640中培养肾癌细胞系786-O,将siRNA(siControl、siLMNA-2)转染786-O细胞,72 h后收集细胞,提取RNA,建立cDNA文库并利用Illumina测序平台进行RNA测序(RNA-seq).测序结果经联川生物平台分析,鉴定DEGs.细胞经siControl、siLMNA-1、siLMNA-2转染后对部分基因进行实时
目的 研究黄连素(BBR)对脊髓损伤大鼠HE病理、骨形态发生蛋白4(BMP-4)mRNA表达及神经元活性的影响.方法 将在广东省医学SD大鼠中心的大鼠随机分为脊髓损伤组(S组);健康对照组(H组);黄连素组(B组),每组10只.采用流式细胞法、TUNEL法、HE染色法免疫组化法、qRT-PCR法检测S组、B组、H组大鼠脊髓细胞凋亡数量、脊髓细胞病变程度、脊髓细胞中BMP-4蛋白阳性表达、脊髓细胞中BMP-4 mRNA的表达含量、脊髓细胞凋亡率的差异性来探究BBR对脊髓损伤大鼠HE病理、BMP-4 mRNA
目的 探讨miR-671-3p对结肠癌体外生物学特性的影响及其机制.方法 体外培养结肠癌RKO和SW620细胞株,转染miR-671-3p的过表达片段和抑制剂,qRT-PCR检测细胞的过表达效率和干扰效率.CCK-8实验检测体外培养细胞的增殖能力,Transwell实验检测体外细胞的迁移能力.生物信息学方法分析CKAP4在结肠癌细胞的表达.结果 在RKO和SW620细胞中过表达miR-671-3p,细胞的体外迁移能力显著降低(RKO细胞:P<0.001;SW620细胞:P=0.004),增殖能力明显下降(
目的 探讨LncRNA MAGI2-AS3对帕金森病细胞模型损伤的影响及其对miR-1277-5p的调控作用.方法 用1-甲基-4-苯基自由基离子(MPP+)诱导的SK-N-SH细胞建立帕金森病细胞模型,实验分组:MPP++si-NC组、MPP++si-MA-GI2-AS3组、MPP++miR-NC组、MPP++miR-1277-5p组、MPP++si-MAGI2-AS3+anti-miR-NC组、MPP++si-MAGI2-AS3+anti-miR-1277-5p组;qRT-PCR检测MAGI2-AS3
目的 借助工具药NG-硝基左旋精氨酸甲酯(L-NAME),探讨内皮型一氧化氮合酶(eNOS)/蛋白激酶G1(PKG-1)通路在蛇床子素(Ost)干预野百合碱(MCT)所致大鼠肺动脉高压(PAH)中的作用.方法 在60只雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠中随机抽取10只为正常对照组(Control组).除Control组外,其余大鼠均采用颈背部一次性皮下注射MCT(55 mg/kg),建立PAH模型,并随机分为模型组(MCT组)、蛇床子素组(Ost组)、Ost+L-NAME组、L-精氨酸组(L-a
目的 研究揿针埋针联合耳穴压豆对老年患者全髋置换术(Total hip arthroplasty,THA)后镇痛及Th1/Th2平衡、细胞因子的影响.方法 纳入2019年1月至2020年6月期间我院收治的198例行THA的老年患者,采用随机数字表法分为A、B和C 3组,每组66例.在给予患者自控镇痛(Patient controlled analgesia,PCA)的基础上,A组给予揿针埋针治疗,B组给予耳穴压豆,C组给予揿针埋针联合耳穴压豆.分别于术后24、48、72h时采用视觉模拟评分法(Visual
目的 分析微小RNA(miRNA,miR)-7155-3p在乳腺癌患者血清中的表达,探讨其对乳腺癌细胞增殖和侵袭的影响及作用机制.方法 采用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测miR-7155-3p在乳腺癌患者血清和乳腺癌细胞系中的表达.以miR-7155-3p表达最少的细胞系为对象,分别转染人工合成miR-NC(阴性对照序列)和miR-7155-3p模拟物,命名为miR-NC组和miR-7155-3p组.采用生物信息学软件预测及双荧光素酶报告实验验证miR-7155-3p的下游靶基因.RT-PCR和
目的 分析胃癌组织中长链非编码RNA成神经细胞瘤相关转录本1(LncRNA NBAT1)的表达及意义.方法 将88例原发性胃癌患者纳入研究,收集术后胃癌组织及癌旁组织作为样本,采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测样本中LncRNA NBAT1的表达,评价LncRNA NBAT1的表达量与患者临床特征关系及其对胃癌的诊断价值.结果 胃癌组织中LncRNA NBAT1的相对表达量为(2.35±0.51),明显低于癌旁组织(5.03±0.74)(P<0.001).LncRNA NBAT1的表达与
目的 探索环指蛋白187(RNF187)在脑胶质瘤中的表达及其与预后生存的关系.方法 选取2015年1月至2018年10月于本院术后病理为脑胶质瘤患者49例,按胶质瘤病理分级分为低度恶性神经胶质瘤组(LM组,18例)和高度恶性神经胶质瘤组(HM组,31例),收集两组受检者的肿瘤组织并检测RNF187和肿瘤标志物Notch1的mRNA和蛋白,并随访患者术后2年生存情况;随后分析RNF187与Notch1的关系,以及与胶质瘤分级和临床预后的关系;最后通过U251细胞转染沉默RNF187,对比分析RNF187沉
目的 对比观察超声引导下椎板后路阻滞(Retrolaminar block,RLB)在后腹腔镜肾切除术后不同性别的术后镇痛效果和康复情况.方法 椎板后路阻滞下后腹腔镜肾切除术患者57例,年龄18～65岁,ASA I或II级,按性别分为两组,A组(男性)28例,B组(女性)29例.两组均于全麻诱导后在超声引导下在术侧行RLB,药物采用0.4％罗哌卡因30 mL,术后均采用同一标准配方的舒芬太尼PCIA.记录术后2、4、6、24、48 h的VAS评分、术后PACU停留时间、镇痛泵有效按压次数、术后首次下床活动