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目的
构建靶向CEA的以Ⅰ型内含子核酶为载体核心介导的生物发光-核素双报告基因显像系统。
方法采用基因工程技术构建靶向CEA的Ⅰ型内含子核酶及核酶-荧光素酶-胸苷激酶(Rib53-Fluc-tk)报告质粒，采用细胞生物发光等方法检测核酶反式剪接产物的表达；以Iodogen固相氧化法合成131I-氟-碘阿糖呋喃基尿嘧啶(FIAU)，行细胞摄取实验。采用两样本t检验、方差分析及最小显著差异(LSD) t检验进行统计分析。
结果Rib53-Fluc-tk测序正确；乳腺癌细胞MCF-7的荧光素酶比值增高，可达0.64±0.10(n＝4)；MCF-7细胞转染Rib53-Fluc-tk后的反式剪接产物条带大小为520 bp，测序结果正确；pCDNA3.1-CEA及Rib53-Fluc-tk共转人胚肾细胞293T，可探测到生物发光信号。131I-FIAU的标记率为(64.02±4.79)%(n＝3)，放化纯为(95.96±1.07)%(n＝3)，标记产物在人血清中24 h的稳定性高。293T单独转染Rib53-Fluc-tk，细胞摄取率仅为(0.31±0.01)%(n＝4)；293T共转染pCDNA3.1-CEA、Rib53-Fluc-tk质粒，细胞摄取率增加至(1.40±0.06)%(n＝4)，F＝1 007.29，t＝136.34，P<0.01。
结论成功构建了Ⅰ型内含子核酶为核心介导的靶向CEA的双报告基因系统，并对CEA mRNA进行了生物发光以及细胞摄取的检测，为改善传统报告基因显像的特异性奠定了体外实验的基础。