【摘 要】
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为了提高L-脯氨酸-4-羟化酶(P4H)合成反式-4-羟基-L-脯氨酸(4-Hyp)的能力,首先对实验室前期构建的重组大肠杆菌E.coliBL21(DE3)/pET-28b-p4h的P4H进行三维结构模拟和“热点”
【机 构】
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浙江省生物有机合成技术研究重点实验室,生物转化与生物净化教育部工程研究中心
【基金项目】
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浙江省自然科学基金青年项目(LQ14B060004);国家自然科学基金青年项目(31500031);浙江省科技计划项目公益技术研究工业项目(2015C31049);浙江工业大学研究生教学改革项目(2018114)的资助
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为了提高L-脯氨酸-4-羟化酶(P4H)合成反式-4-羟基-L-脯氨酸(4-Hyp)的能力,首先对实验室前期构建的重组大肠杆菌E.coliBL21(DE3)/pET-28b-p4h的P4H进行三维结构模拟和“热点”氨基酸分析,选择了7个位于“疏水口袋”附近的氨基酸残基(Y205,K207I241,F137,T142,V53和R45)进行定点饱和突变,得到P4H酶活力明显提高的突变型酶F137R和Y205K。采用F137R和Y205K催化转化0.35g/LL-脯氨酸产物4(Hyp质量浓度分别为55.09mg
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