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摘要：目的：通过观测耳针、六味地黄丸加味丹参对D-半乳糖衰老大鼠海马组织神经生长因子（NGF）、脑源性神经营养因子（BDNF）的蛋白表达的影响，探讨耳针、六味地黄丸加味丹参预防和延缓衰老的可能机理，为耳针、中药延缓衰老在临床上的运用提供新的理论和实验依据。结果：：1、耳针组、中药组、耳针+中药组海马组织NGF蛋白表达增加，与模型组相比较，差异具有显著性（P<0.01或P<0.05）。其中耳针+中药组与耳针组、中药组比较，差异有显著性（P<0.01）；耳针组与中药组比较，差异无显著性（P>0.05）。2、耳针组、中药组、耳针+中药组海马组织BDNF蛋白表达增加，与模型组相比較，差异具有显著性（P<0.01或P<0.05）。其中耳针+中药组与耳针组、中药组比较，差异有显著性（P<0.01）；耳针组与中药组比较，差异无显著性（P>0.05）。结论：耳针、中药具有延缓衰老的作用，从神经内分泌角度看，其可能的作用机理是：耳针、中药促进内源性神经生长因子（NGF）、脑源性神经营养因子（BDNF）的表达，发挥其营养、支持、保护神经细胞、抑制细胞凋亡的作用，从而调节神经内分泌系统功能最终达到延缓衰老的目的。
关键词：衰老； 耳针；中药； 海马； 神经生长因子； 脑源性神经营养因子
【中图分类号】R453【文献标识码】 A【文章编号】1002-3763（2014）09-0071-02目前全球都面临人口老龄化问题，老年人口的增多带来了一系列社会和经济问题。因此，对衰老机制和延缓衰老的研究日益受到重视，其中神经系统的老龄性退行性变化引起的疾病，如老年痴呆、帕金森病等已成为医学领域中研究的热点，受到普遍关注。本研究采用D-半乳糖致衰老的方法复制衰老大鼠模型，以海马神经元神经营养素家族成员神经生长因子（NGF）、脑源性神经营养因子（BDNF）的表达以及雌鼠血清非肽类神经生长因子雌激素（E2）的含量作为检测指标，探讨耳针、中药预防和延缓衰老的可能途径，探索其延缓衰老作用的新机制，为耳针、中药延缓衰老在临床上的运用提供新的理论和实验依据。
1 材料与方法
1.1 材料：
1.1.1 动物：Wistar健康大鼠70只，清洁级，雌雄各半，双耳无缺损，3～4月龄，体重250～300g（由贵阳医学院实验动物中心提供），造模前在相同光照条件大鼠适应性喂养1周，雌雄分开，自由摄取标准饲料（由贵阳医学院实验动物中心提供），饮用干净自来水，室温控制在15～18℃之间，湿度70%左右。
1.1.2 主要试剂和仪器：六味地黄丸：贵阳德昌祥药业有限公司；丹参：贵阳阜康堂药业公司；SOD试剂盒：南京建成生物工程有限公司；MDA试剂盒：南京建成生物工程有限公司
BDNF免疫组化试剂盒：武汉博士德生物工程有限公司；NGF免疫组化试剂盒：武汉博士德生物工程有限公司；揿针（耳针）：北京环亚医药器械公司；台式高速离心机：上海医用分析仪器厂。
1.2 方法
1.2.1 实验动物分组：70只 Wistar健康大鼠随机分为5组，每组14只（雌雄各半，分开饲养），即对照组、模型组、耳针组、中药组、耳针+中药组。
1.2.2 动物模型建立[1]：Wistar大鼠适应性喂养1周后，采用国际上公认的D-半乳糖复制衰老模型。6周后，取大鼠静脉血测血清超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量。模型组与对照组比较，模型组SOD活性明显降低，MDA含量明显增高（见表1、2），证明模型复制成功。
1.3 治疗方法
1.3.1 耳针组：在造模同时进行耳针治疗，根据华兴邦《实验动物与动物实验》中及林文注[2] 、李辞蓉[3]所介绍的动物穴位定位，选取大鼠双侧耳穴（肾穴、脾穴、肝穴）以揿针按压后固定留置于耳上。
1.3.2 中药组：在造模同时每日给予六味地黄丸（由熟地、山药、山萸肉、茯苓、泽泻、牡丹皮组成）加丹参磨制成中药粉末，每只大鼠每日按成人剂量的10倍给药，拌入饲料后混匀，自由摄食。
1.3.3 耳针+中药组：造模同时进行耳针+中药治疗，取穴及中药喂服方法同前。以上治疗时间均为6周[1]。
1.4 指标及检测
1.4.1 血清SOD、MDA的检测
血清SOD、MDA的检测均按试剂盒说明书操作。SOD的活性采用黄嘌呤氧化酶法检测； MDA的含量采用硫代巴比妥酸（TAB）法检测。
1.4.2 NGF、BDNF的免疫组织化学染色，
1.4.3 免疫组化染色阳性结果判断：阳性信号主要位于胞浆内，呈棕黄色或黄色者为阳性细胞。
1.4.4 数据处理及图像分析：数据采用SPSS12.0统计软件进行储存、整理、分析，各项指标采用均数±标准差表示，组间数据采用单因素方差分析及q检验。
图像资料采用贵阳医学院病理科Biomias99图像分析系统。取视场面积443268um2，每张切片在显微镜的10×40倍目镜下随机选5个视场，通过摄像头采集图像进入Biomias99图像分析系统，每个视场内选取5个阳性表达区域进行光密度（OD）测定，取其平均值即为该切片的平均光密度。所有OD值测量均在相同光学、光源条件下完成。用鼠标点击法计数阳性（表达）细胞。记录各组海马区NGF和BDNF的阳性细胞数及其表达的平均光密度值。
2 结果
2.1 一般情况观察结果：对照组大鼠毛发光泽、顺滑，皮肤弹性好，行动敏捷，自主活动佳，大便成形，呈黄褐色，无腥臭。模型组大鼠毛发枯黄、无光泽，皮肤粗糙、弹性差，行动迟缓，自主活动明显降低，大便较稀，较为腥臭。其余治疗组大鼠上述表现较模型组均见良性逆转。
2.2 各组大鼠血清超氧化物歧化酶（SOD）活性的变化（见表1） 表1 各组大鼠血清SOD活性的比较（X±S）
Tab-1 The Comparison of Serum SOD Activity among Groups（X±S）
组 别 例 数 SOD（NU/ml）对 照 组13659.15±126.33模 型 组12 314.65±118.49 #耳 针 组14553.12±61.80*中 药 组14553.02±83.38*耳针+中药组14 606.31±73.12*△▲注：与对照组比较 # ：P<0.01 与模型组比较 * ：P<0.05
与耳针组比较 △：P<0.05 与中药组比较 ▲：P<0.05
表2 各組大鼠血清MDA含量的比较（X±S）
Tab-2 The Comparison of Serum MDA Content among Groups（X±S）
组 别 例 数 MDA（nmol/ml）对 照 组130.65±0.40模 型 组122.03±0.68#耳 针 组141.15±0.44*中 药 组141.40±0.31*耳针+中药组14 0.64±0.31*△▲注：与对照组比较 # ：P<0.001 与模型组比较 * ：P<0.05
与耳针组比较 △：P<0.01 与中药组比较 ▲：P<0.01
由表2统计结果表明：与对照组比较，模型组血清MDA含量显著升高（P<0.001）；耳针组、中药组、耳针+中药组与模型组比较，血清MDA含量均有明显降低（P<0.05）；三个治疗组间两两比较，耳针+中药组MDA含量低于耳针组、中药组（P<0.01）；耳针组、中药组间差异无显著性（P>0.05）。
2.3 各组大鼠血清丙二醛（MDA）含量的变化（见表2）
2.4 海马组织神经营养因子（NGF）免疫组织化学染色结果（见表3）
由表1统计分析表明：与对照组比较，模型组血清SOD活性显著降低（P<0.01）；耳针组、中药组、耳针+中药组与模型组比较，血清SOD活性均有明显升高（P<0.05）；三个治疗组间两两比较，耳针+中药组SOD活性高于耳针组、中药组（P<0.05）；耳针组、中药组间差异无显著性（P>0.05）。
表3 各组NGF免疫阳性细胞数目和平均光密度比较（X±S）
Tab-3 The comparison of amount of Immunal positive cell and meaning of lingt density of NGF among groups （X±S）
组 别例 数 阳性细胞数 平均光密度对 照 组818.51±1.7288.99±3.17模 型 组82.42±1.16#185.74±9.81#耳 针 组810.89±1.18*140.60±3.44*中 药 组810.66±1.16*140.21±3.44*耳针+中药组816.22±1.48*△▲93.24±3.41*△▲注：与对照组比较 # ：P<0.01 与模型组比较 * ：P<0.05
与耳针组比较 △：P<0.01 与中药组比较 ▲：P<0.01
2.5 脑源性神经营养因子（BNGF）免疫组织化学染色结果（见表4）
表4 各组BDNF免疫阳性细胞数目和平均光密度比较（X±S）
Tab-4 The comparison of amount of Immunal positive cell and meaning of lingt density of BDNF among groups （X±S）
组 别例 数 阳性细胞数 平均光密度对 照 组819.6±1.5294.44±4.38模 型 组8 2.47±1.27#192.69±3.94#耳 针 组8 8.93±1.31*152.30±3.13*中 药 组89.45±1.06*151.92±2.88*耳针+中药组815.23±1.42*△▲116.04±2.35*△▲注：与对照组比较 # ：P<0.01 与模型组比较 * ：P<0.05
与耳针组比较 △：P<0.01 与中药组比较 ▲：P<0.01
3 讨论
衰老的神经内分泌调节学说认为，机体在神经系统的控制下，通过神经内分泌的调节，完成其生长、发育、成熟、衰老乃至死亡这一系列生物过程。神经内分泌调节各个环节的增龄性衰退变化，都将加速衰老过程。有实验研究显示[4-8]，老年痴呆、帕金森病、亨廷顿氏舞蹈症等老年性退行性疾病的发生、发展可能与缺乏神经营养家族（NTs）成员如NGF、BDNF的营养作用有关。
现代研究认为[9]，耳针对机体的作用是神经体液综合调节的结果。针刺或贴压耳穴可调节脏腑和器官功能活动，提高机体免疫功能，改善肾虚，改善激素水平，从而达到延缓衰老的目的[10]。本研究根据辨证选穴原则，选取耳穴“肾”、“脾”、“肝”。“肾”穴具有培补肾气、填精补髓、培元固本的作用，“脾”穴能养胃健脾、益气输津，“肝”穴具有调畅气机、活血化瘀的作用，三穴共奏扶正祛瘀之功，以达延缓衰老之效。
大量的动物实验和临床研究发现，六味地黄丸具有抗氧化、抗肿瘤、增强免疫功能、改善微循环、提高应激能力、延长机体生存寿命、延缓衰老等功能[11-14]。此外，现代医学还利用基因芯片技术发现[15]，六味地黄丸可调节相关基因的表达水平，从而调节机体功能，起到延缓衰老的作用。丹参有很强的抗氧化作用，能消除自由基，增强机体的抗氧化能力，能保护DNA，上调bcl-2表达 ，对神经细胞凋亡有明显的抑制作用[16]。此外，丹参提取物可有效改善氧化衰老模型小鼠的免疫状态[17]。
本研究提示耳针、中药延缓衰老的机制可能是：耳针、中药能促进海马组织内源性NGF、BDNF表达，发挥其对神经元细胞的营养、支持和保护作用，延缓神经系统的老龄性改变，调节神经内分泌系统功能，从而起到扶正化瘀、调节阴阳、疏经通络、调整脏腑功能的作用，最终达到延缓衰老目的。同时，本实验还发现，耳针+中药组各项指标均优于耳针组和中药组，且差异具有显著性，说明耳针与中药具有协同作用，这可能与耳针、中药共同发挥了增强免疫、调节自由基、调节脂代谢、改善激素水平等功能有关。 参考文献
[1]梁欣，耳针、艾灸对D-半乳糖致衰老大鼠血清褪黑素含量及其昼夜节律性的影响，中国针灸，2004；24（8）：573
[2]林文注，王佩主编，实验针灸学，上海科学技术出版社，1994
[3]李辞蓉，华兴邦，周浩良，等，豚鼠针刺穴位图谱的研制，上海针灸杂志，1992，11（2）：28-30
[4]王海峰等，原发性帕金森病患者血清神经生长因子测定及其临床意义，浙江医学，2004；26（11）：811-813
[5]王子玫等，脑源性神经营养因子与阿尔茨海默病的关系，上海第二医科大学学报，2004；24（10）：866-869
[6]牟芝蓉，腦源性神经营养因子及其临床研究进展，生物技术通报，1999；10（2）：148-151
[7]林艳丽，脑源性神经营养因子研究进展，生物技术通讯，2003；14（3）：241-244
[8]李林，老年性痴呆治疗药物研究进展[A].见：盛树力.老年性痴呆：从分子生物学到临床诊治[C].北京：科学技术文献出版社，1998：112
[9]黄丽春，耳穴诊断学，科学技术文献出版社，2004：317～319
[10]罗兴中，耳压疗法抗衰老之机理探讨，针灸临床杂志，1994；10（4）：13
[11]汤依群， 何小健， 黄 宝， 等. 六味地黄丸抗氧化作用研究[J ] . 中药药理与临床，2001 ，17（5） ：2 - 3
[12]杨 胜， 张永祥， 吕晓东， 等. 六味地黄活性部位3A的免疫调节作用机理研究[J ] . 中国中西医结合杂志，2001 ，21（2） ：119 - 122.
[13]周坤福， 王明艳， 赵凤鸣， 等. 六味地黄丸延缓衰老作用机理的实验研究[J ] . 江苏中医，1999 ，20（1） ：44 - 45.
[14]刘福君， 茄详斌. 地黄及六味地黄汤（丸） 的免疫药理及抗肿瘤作用[J ] . 中草药， 1995 ，27（2） ：116 - 118.
[15]余榕捷等，利用基因芯片研究六味地黄丸对老年大鼠基因表达的影响，中国病理生理杂志，2004 ；20（2） ：260 – 265
[16]朱健，丹参对衰老鼠脑海马神经细胞凋亡作用的研究，中国老年学杂志，2001；21（1）：46
[17]郝志勇，丹参提取物对氧化衰老模型小鼠的免疫保护作用，哈尔滨商业大学学报，2003；19（3）：254
关键词：衰老； 耳针；中药； 海马； 神经生长因子； 脑源性神经营养因子
【中图分类号】R453【文献标识码】 A【文章编号】1002-3763（2014）09-0071-02目前全球都面临人口老龄化问题，老年人口的增多带来了一系列社会和经济问题。因此，对衰老机制和延缓衰老的研究日益受到重视，其中神经系统的老龄性退行性变化引起的疾病，如老年痴呆、帕金森病等已成为医学领域中研究的热点，受到普遍关注。本研究采用D-半乳糖致衰老的方法复制衰老大鼠模型，以海马神经元神经营养素家族成员神经生长因子（NGF）、脑源性神经营养因子（BDNF）的表达以及雌鼠血清非肽类神经生长因子雌激素（E2）的含量作为检测指标，探讨耳针、中药预防和延缓衰老的可能途径，探索其延缓衰老作用的新机制，为耳针、中药延缓衰老在临床上的运用提供新的理论和实验依据。
1 材料与方法
1.1 材料：
1.1.1 动物：Wistar健康大鼠70只，清洁级，雌雄各半，双耳无缺损，3～4月龄，体重250～300g（由贵阳医学院实验动物中心提供），造模前在相同光照条件大鼠适应性喂养1周，雌雄分开，自由摄取标准饲料（由贵阳医学院实验动物中心提供），饮用干净自来水，室温控制在15～18℃之间，湿度70%左右。
1.1.2 主要试剂和仪器：六味地黄丸：贵阳德昌祥药业有限公司；丹参：贵阳阜康堂药业公司；SOD试剂盒：南京建成生物工程有限公司；MDA试剂盒：南京建成生物工程有限公司
BDNF免疫组化试剂盒：武汉博士德生物工程有限公司；NGF免疫组化试剂盒：武汉博士德生物工程有限公司；揿针（耳针）：北京环亚医药器械公司；台式高速离心机：上海医用分析仪器厂。
1.2 方法
1.2.1 实验动物分组：70只 Wistar健康大鼠随机分为5组，每组14只（雌雄各半，分开饲养），即对照组、模型组、耳针组、中药组、耳针+中药组。
1.2.2 动物模型建立[1]：Wistar大鼠适应性喂养1周后，采用国际上公认的D-半乳糖复制衰老模型。6周后，取大鼠静脉血测血清超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量。模型组与对照组比较，模型组SOD活性明显降低，MDA含量明显增高（见表1、2），证明模型复制成功。
1.3 治疗方法
1.3.1 耳针组：在造模同时进行耳针治疗，根据华兴邦《实验动物与动物实验》中及林文注[2] 、李辞蓉[3]所介绍的动物穴位定位，选取大鼠双侧耳穴（肾穴、脾穴、肝穴）以揿针按压后固定留置于耳上。
1.3.2 中药组：在造模同时每日给予六味地黄丸（由熟地、山药、山萸肉、茯苓、泽泻、牡丹皮组成）加丹参磨制成中药粉末，每只大鼠每日按成人剂量的10倍给药，拌入饲料后混匀，自由摄食。
1.3.3 耳针+中药组：造模同时进行耳针+中药治疗，取穴及中药喂服方法同前。以上治疗时间均为6周[1]。
1.4 指标及检测
1.4.1 血清SOD、MDA的检测
血清SOD、MDA的检测均按试剂盒说明书操作。SOD的活性采用黄嘌呤氧化酶法检测； MDA的含量采用硫代巴比妥酸（TAB）法检测。
1.4.2 NGF、BDNF的免疫组织化学染色，
1.4.3 免疫组化染色阳性结果判断：阳性信号主要位于胞浆内，呈棕黄色或黄色者为阳性细胞。
1.4.4 数据处理及图像分析：数据采用SPSS12.0统计软件进行储存、整理、分析，各项指标采用均数±标准差表示，组间数据采用单因素方差分析及q检验。
图像资料采用贵阳医学院病理科Biomias99图像分析系统。取视场面积443268um2，每张切片在显微镜的10×40倍目镜下随机选5个视场，通过摄像头采集图像进入Biomias99图像分析系统，每个视场内选取5个阳性表达区域进行光密度（OD）测定，取其平均值即为该切片的平均光密度。所有OD值测量均在相同光学、光源条件下完成。用鼠标点击法计数阳性（表达）细胞。记录各组海马区NGF和BDNF的阳性细胞数及其表达的平均光密度值。
2 结果
2.1 一般情况观察结果：对照组大鼠毛发光泽、顺滑，皮肤弹性好，行动敏捷，自主活动佳，大便成形，呈黄褐色，无腥臭。模型组大鼠毛发枯黄、无光泽，皮肤粗糙、弹性差，行动迟缓，自主活动明显降低，大便较稀，较为腥臭。其余治疗组大鼠上述表现较模型组均见良性逆转。
2.2 各组大鼠血清超氧化物歧化酶（SOD）活性的变化（见表1） 表1 各组大鼠血清SOD活性的比较（X±S）
Tab-1 The Comparison of Serum SOD Activity among Groups（X±S）
组 别 例 数 SOD（NU/ml）对 照 组13659.15±126.33模 型 组12 314.65±118.49 #耳 针 组14553.12±61.80*中 药 组14553.02±83.38*耳针+中药组14 606.31±73.12*△▲注：与对照组比较 # ：P<0.01 与模型组比较 * ：P<0.05
与耳针组比较 △：P<0.05 与中药组比较 ▲：P<0.05
表2 各組大鼠血清MDA含量的比较（X±S）
Tab-2 The Comparison of Serum MDA Content among Groups（X±S）
组 别 例 数 MDA（nmol/ml）对 照 组130.65±0.40模 型 组122.03±0.68#耳 针 组141.15±0.44*中 药 组141.40±0.31*耳针+中药组14 0.64±0.31*△▲注：与对照组比较 # ：P<0.001 与模型组比较 * ：P<0.05
与耳针组比较 △：P<0.01 与中药组比较 ▲：P<0.01
由表2统计结果表明：与对照组比较，模型组血清MDA含量显著升高（P<0.001）；耳针组、中药组、耳针+中药组与模型组比较，血清MDA含量均有明显降低（P<0.05）；三个治疗组间两两比较，耳针+中药组MDA含量低于耳针组、中药组（P<0.01）；耳针组、中药组间差异无显著性（P>0.05）。
2.3 各组大鼠血清丙二醛（MDA）含量的变化（见表2）
2.4 海马组织神经营养因子（NGF）免疫组织化学染色结果（见表3）
由表1统计分析表明：与对照组比较，模型组血清SOD活性显著降低（P<0.01）；耳针组、中药组、耳针+中药组与模型组比较，血清SOD活性均有明显升高（P<0.05）；三个治疗组间两两比较，耳针+中药组SOD活性高于耳针组、中药组（P<0.05）；耳针组、中药组间差异无显著性（P>0.05）。
表3 各组NGF免疫阳性细胞数目和平均光密度比较（X±S）
Tab-3 The comparison of amount of Immunal positive cell and meaning of lingt density of NGF among groups （X±S）
组 别例 数 阳性细胞数 平均光密度对 照 组818.51±1.7288.99±3.17模 型 组82.42±1.16#185.74±9.81#耳 针 组810.89±1.18*140.60±3.44*中 药 组810.66±1.16*140.21±3.44*耳针+中药组816.22±1.48*△▲93.24±3.41*△▲注：与对照组比较 # ：P<0.01 与模型组比较 * ：P<0.05
与耳针组比较 △：P<0.01 与中药组比较 ▲：P<0.01
2.5 脑源性神经营养因子（BNGF）免疫组织化学染色结果（见表4）
表4 各组BDNF免疫阳性细胞数目和平均光密度比较（X±S）
Tab-4 The comparison of amount of Immunal positive cell and meaning of lingt density of BDNF among groups （X±S）
组 别例 数 阳性细胞数 平均光密度对 照 组819.6±1.5294.44±4.38模 型 组8 2.47±1.27#192.69±3.94#耳 针 组8 8.93±1.31*152.30±3.13*中 药 组89.45±1.06*151.92±2.88*耳针+中药组815.23±1.42*△▲116.04±2.35*△▲注：与对照组比较 # ：P<0.01 与模型组比较 * ：P<0.05
与耳针组比较 △：P<0.01 与中药组比较 ▲：P<0.01
3 讨论
衰老的神经内分泌调节学说认为，机体在神经系统的控制下，通过神经内分泌的调节，完成其生长、发育、成熟、衰老乃至死亡这一系列生物过程。神经内分泌调节各个环节的增龄性衰退变化，都将加速衰老过程。有实验研究显示[4-8]，老年痴呆、帕金森病、亨廷顿氏舞蹈症等老年性退行性疾病的发生、发展可能与缺乏神经营养家族（NTs）成员如NGF、BDNF的营养作用有关。
现代研究认为[9]，耳针对机体的作用是神经体液综合调节的结果。针刺或贴压耳穴可调节脏腑和器官功能活动，提高机体免疫功能，改善肾虚，改善激素水平，从而达到延缓衰老的目的[10]。本研究根据辨证选穴原则，选取耳穴“肾”、“脾”、“肝”。“肾”穴具有培补肾气、填精补髓、培元固本的作用，“脾”穴能养胃健脾、益气输津，“肝”穴具有调畅气机、活血化瘀的作用，三穴共奏扶正祛瘀之功，以达延缓衰老之效。
大量的动物实验和临床研究发现，六味地黄丸具有抗氧化、抗肿瘤、增强免疫功能、改善微循环、提高应激能力、延长机体生存寿命、延缓衰老等功能[11-14]。此外，现代医学还利用基因芯片技术发现[15]，六味地黄丸可调节相关基因的表达水平，从而调节机体功能，起到延缓衰老的作用。丹参有很强的抗氧化作用，能消除自由基，增强机体的抗氧化能力，能保护DNA，上调bcl-2表达 ，对神经细胞凋亡有明显的抑制作用[16]。此外，丹参提取物可有效改善氧化衰老模型小鼠的免疫状态[17]。
本研究提示耳针、中药延缓衰老的机制可能是：耳针、中药能促进海马组织内源性NGF、BDNF表达，发挥其对神经元细胞的营养、支持和保护作用，延缓神经系统的老龄性改变，调节神经内分泌系统功能，从而起到扶正化瘀、调节阴阳、疏经通络、调整脏腑功能的作用，最终达到延缓衰老目的。同时，本实验还发现，耳针+中药组各项指标均优于耳针组和中药组，且差异具有显著性，说明耳针与中药具有协同作用，这可能与耳针、中药共同发挥了增强免疫、调节自由基、调节脂代谢、改善激素水平等功能有关。 参考文献
[1]梁欣，耳针、艾灸对D-半乳糖致衰老大鼠血清褪黑素含量及其昼夜节律性的影响，中国针灸，2004；24（8）：573
[2]林文注，王佩主编，实验针灸学，上海科学技术出版社，1994
[3]李辞蓉，华兴邦，周浩良，等，豚鼠针刺穴位图谱的研制，上海针灸杂志，1992，11（2）：28-30
[4]王海峰等，原发性帕金森病患者血清神经生长因子测定及其临床意义，浙江医学，2004；26（11）：811-813
[5]王子玫等，脑源性神经营养因子与阿尔茨海默病的关系，上海第二医科大学学报，2004；24（10）：866-869
[6]牟芝蓉，腦源性神经营养因子及其临床研究进展，生物技术通报，1999；10（2）：148-151
[7]林艳丽，脑源性神经营养因子研究进展，生物技术通讯，2003；14（3）：241-244
[8]李林，老年性痴呆治疗药物研究进展[A].见：盛树力.老年性痴呆：从分子生物学到临床诊治[C].北京：科学技术文献出版社，1998：112
[9]黄丽春，耳穴诊断学，科学技术文献出版社，2004：317～319
[10]罗兴中，耳压疗法抗衰老之机理探讨，针灸临床杂志，1994；10（4）：13
[11]汤依群， 何小健， 黄 宝， 等. 六味地黄丸抗氧化作用研究[J ] . 中药药理与临床，2001 ，17（5） ：2 - 3
[12]杨 胜， 张永祥， 吕晓东， 等. 六味地黄活性部位3A的免疫调节作用机理研究[J ] . 中国中西医结合杂志，2001 ，21（2） ：119 - 122.
[13]周坤福， 王明艳， 赵凤鸣， 等. 六味地黄丸延缓衰老作用机理的实验研究[J ] . 江苏中医，1999 ，20（1） ：44 - 45.
[14]刘福君， 茄详斌. 地黄及六味地黄汤（丸） 的免疫药理及抗肿瘤作用[J ] . 中草药， 1995 ，27（2） ：116 - 118.
[15]余榕捷等，利用基因芯片研究六味地黄丸对老年大鼠基因表达的影响，中国病理生理杂志，2004 ；20（2） ：260 – 265
[16]朱健，丹参对衰老鼠脑海马神经细胞凋亡作用的研究，中国老年学杂志，2001；21（1）：46
[17]郝志勇，丹参提取物对氧化衰老模型小鼠的免疫保护作用，哈尔滨商业大学学报，2003；19（3）：254