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目的探讨人骨肉瘤细胞(U-2 OS)对甲氨蝶呤(MTX)耐药的机制。方法采用大剂量冲击与逐步增加剂量相结合的方法,对U-2 OS细胞进行诱导培养,建立4株耐药细胞株U-2 OS/R1一U-2OS/R4。MTT法检测并比较各细胞亚系对MTX的敏感性,半定量RT-PCR法检测各亚系还原性叶酸载体(RFC)、二氢叶酸还原酶(DH-FR)mRNA表达。结果本实验成功建立了4株MTX耐药细胞亚系,即U-2 OS/R1~U-2 OS/R4;MTT法显示各亚系耐药性逐渐增加,MTX耐药与RFC mRNA表达降低及DHF