【摘 要】
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利用全基因合成方法合成了强烈炽热球菌(Pyrococcus furiosus)的几丁质酶编码基因并在大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)中实现了可溶表达。利用该酶对低脱乙酰度壳聚糖进行
【机 构】
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中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室
【基金项目】
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“十三五”国家重点研发计划重点专项(2016YFB0301502),国家自然科学基金联合基金项目(U1608255)
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利用全基因合成方法合成了强烈炽热球菌(Pyrococcus furiosus)的几丁质酶编码基因并在大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)中实现了可溶表达。利用该酶对低脱乙酰度壳聚糖进行水解并对获得的壳寡糖产物进行了组成及结构分析。分子排阻高效液相色谱(Size exclusion high performance liquid chromatography,SE-HPLC)结果显示,水解产物分子量分布范围为1-5K。基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(Matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)分析结果显示,酶解产物中包含聚合度2-9,不同脱乙酰度的壳寡糖。核磁共振(Nuclear magnetic resonance,NMR)对酶解产物壳寡糖的结构鉴定结果显示,所有寡糖组分的还原端均主要由两个连续的N-乙酰氨基葡萄糖组成。综上,我们利用来源于强烈炽热球菌的几丁质酶制备了还原末端结构确定的低脱乙酰度壳寡糖,为复杂结构壳寡糖结构与功能关系研究奠定了基础。
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