富甘氨酸果蝇抗菌肽在大肠杆菌中的直接表达和纯化

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利用RT—PCR技术从果蝇总RNA中克隆出富甘氨酸果蝇抗菌肽基因,将该基因插入原核表达载体pET-32a(+)的Nde I和Xho I酶切位点之间,然后用重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)利用乳糖操纵子的葡萄糖效应IPTG诱导表达,经15%SDS—PAGE、Western blot分析,在大约8kD处出现了含6×His标签的抗菌肽蛋白。再以Ni—N TA纯化树脂进行亲和层析、脱盐、冻干,成功制备了富甘氨酸果蝇抗菌肽蛋白。
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