【摘 要】
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为建立鲜奶中肠出血性大肠杆菌( Enterohaemorrhagic E. coli, EHEC) O157∶ H7的特异性检测方法,以EHEC O157∶ H7独有的遗传标志性基因Z0372为靶序列设计引物和探针,以梯度
【机 构】
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江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心
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为建立鲜奶中肠出血性大肠杆菌( Enterohaemorrhagic E. coli, EHEC) O157∶ H7的特异性检测方法,以EHEC O157∶ H7独有的遗传标志性基因Z0372为靶序列设计引物和探针,以梯度稀释的含有Z0372基因的重组质粒作为标准品进行Taqman荧光定量PCR反应,分析该方法的敏感性、特异性,并检测鲜奶样品以验证Taqman荧光定量 PCR实用性和可靠性。结果表明,建立的定量PCR方法在1μl 1×101拷贝至1μl 1×106拷贝之间具有良好的线性关系,相关系数达到0.996,扩增效率112%。该方法的检测灵敏度为1μl 70拷贝,敏感性较高,而且特异性良好,与其他血清型大肠杆菌、沙门氏杆菌和志贺氏菌等易混淆菌株核酸之间没有交叉反应。批间和批内检测的变异系数( RSD)低于2%,表明该方法重复性良好。
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