探讨PI3K–p110σ抑制剂CAL–101联合硼替佐米(BTZ)对人套细胞淋巴瘤(MCL)细胞株增殖和凋亡的影响及其作用机制。
方法以不同浓度的CAL–101和BTZ分别处理MCL细胞株HBL–2、Jeko–1和Z138，采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组细胞的增殖抑制率，根据MTT法的检测结果确定药物的半数抑制浓度(IC50)以及联合用药的浓度。以不同浓度的CAL–101处理HBL–2、Jeko–1和Z138细胞，Western blot法检测各组细胞中PI3K/Akt和ERK通路蛋白的表达。采用流式细胞术检测经CAL–101、BTZ和CAL–101＋BTZ处理后HBL–2和Z138细胞的凋亡。以酶联免疫吸附法和Western blot法检测经CAL–101、BTZ和CAL–101＋BTZ处理后HBL–2、Jeko–1和Z138细胞中核因子κB(NF–κB)和p–Akt的活性，以及HBL–2和Z138细胞中caspase–3蛋白的表达。
结果CAL–101和BTZ单药对Z138、HBL–2和Jeko–1细胞的增殖有明显的抑制作用，其抑制作用呈浓度和时间依赖性，且CAL–101和BTZ具有明显的协同作用。HBL–2、Jeko–1和Z138细胞均表达PI3K–p110σ蛋白。随着CAL–101浓度的增加，p–Akt和p–ERK蛋白的表达下降。经药物处理48 h后，对照组、CAL–101组、BTZ组和CAL–101＋BTZ组Z138细胞的凋亡率分别为(2.6±1.8)%、(40.0±3.0)%、(34.0±1.0)%和(67.4±1.0)%；经药物处理96 h后，对照组、CAL–101组、BTZ组和CAL–101＋BTZ组HBL–2细胞的凋亡率分别为(7.4±0.6)%、(30.7±5.7)%、(12.0±1.0)%和(85.0±4.0)%；CAL–101＋BTZ组细胞的凋亡率均明显高于单药组(均P<0.001)。在CAL–101组、BTZ组、CAL–101＋BTZ组Z138、HBL–2和Jeko–1细胞中，NF–κB的活性以及p–Akt蛋白的表达均明显低于对照组(P<0.05)。在CAL–101＋BTZ组Z138和HBL–2细胞中，caspase–3蛋白的表达上调。
结论CAL–101与BTZ协同作用的机制可能是通过关闭Akt和NF–κB信号通路，导致凋亡蛋白caspase–3的表达上调，从而诱导MCL细胞产生凋亡，抑制MCL细胞增殖。