【摘 要】
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目的:探讨竹节参皂苷(Ⅳa)减轻异丙肾上腺素(ISO)诱导的小鼠心肌纤维化作用机制.方法:白变种实验室老鼠(Balb/C)小鼠40只并随机分为4组:正常对照组(n=10)、ISO模型组(n=10)、Ⅳa低剂量组(n=10)、Ⅳa高剂量组(n=10).采用皮下注射ISO构建小鼠心肌纤维化模型,Ⅳa剂量组在建模同时给予Ⅳa治疗,正常组给予等量生理盐水.采用马松(Masson)三色标准和HE染色方法分析评估心脏组织形态学和胶原沉积.采用小麦胚芽凝集素(WGA)染色法测定心肌细胞面积.蛋白免疫印迹试验检测细胞自噬
【机 构】
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成都市第三人民医院心脏大血管外科 四川成都610014
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目的:探讨竹节参皂苷(Ⅳa)减轻异丙肾上腺素(ISO)诱导的小鼠心肌纤维化作用机制.方法:白变种实验室老鼠(Balb/C)小鼠40只并随机分为4组:正常对照组(n=10)、ISO模型组(n=10)、Ⅳa低剂量组(n=10)、Ⅳa高剂量组(n=10).采用皮下注射ISO构建小鼠心肌纤维化模型,Ⅳa剂量组在建模同时给予Ⅳa治疗,正常组给予等量生理盐水.采用马松(Masson)三色标准和HE染色方法分析评估心脏组织形态学和胶原沉积.采用小麦胚芽凝集素(WGA)染色法测定心肌细胞面积.蛋白免疫印迹试验检测细胞自噬相关标志物(LC3-Ⅱ、Beclin1和p62)和腺苷单磷酸活化蛋白激酶(AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/自噬激活激酶1(ULK1)信号通路相关标志物.采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)和Ⅰ型前胶原羧基末端肽(PICP)的含量.结果:高剂量Ⅳa(15mg/kg)治疗后,HW/BW和LVW/BW较ISO模型组升高,而血清中Ang Ⅱ和PICP含量降低.IVa以剂量依赖的方式减轻心肌细胞在心脏组织中的损伤.皮下注射ISO后,心肌间质内胶原沉积明显,Ⅳa治疗后胶原沉积明显减少.Ⅳa可有效降低ISO诱导的小鼠心肌细胞面积大小.Ⅳa能有效抑制ISO诱导的LC3-Ⅱ和Beclin1蛋白降低,减少p62蛋白增多.AMPK直接磷酸化ULK1(Ser555),通过抑制mTOR磷酸化间接抑制ULK1 (Ser757)磷酸化,均参与了ISO诱导的心肌纤维化小鼠自噬活性的降低;此外,Ⅳa低剂量组和Ⅳa高剂量组均显著增加了AMPK磷酸化,并抑制了mTOR磷酸化,降低了ULK1(Ser757)磷酸化.结论:Ⅳa通过AMPK/mTOR/JLK1途径激活自噬,减轻了ISO诱导的心肌纤维化.表明Ⅳa是一种潜在的抗心肌纤维化候选药物,是治疗心脏病的潜在药物靶点.
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