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[摘 要]本文以提取沙棘油后的沙棘籽渣作为原料，乙醇为提取液，采用大孔吸附树脂精制法提取沙棘籽原花青素。结果表明采用D3520型大孔树脂，用50%乙醇洗脱提取，温度30℃，料液比1∶8（w/v），连续提取12h（60min/次），原花青素的提取率可达9.84%（以脱脂沙棘干重计），纯度达39.18%。该方法对沙棘籽渣中原花青素具有良好的精制效果。
[关键词]沙棘籽渣；原花青素；树脂；精制
中图分类号：TQ914.1 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2013）09-0101-01
原花青素（Procyanidins，PC）广泛存在于各种植物（如葡萄、山楂、苹果、沙棘等）的皮、核或种籽中，是一大类多酚类化合物的总称，由不同数量的儿茶素或表儿茶素结合而成。最简单的原花青素是由儿茶素与表儿茶素形成的二聚体，此外还有三聚体、四聚体，直至十聚体。按聚合度大小的不同，一般将二至四聚体者称为低聚原花青素（O1igomeric Proanthocyanidins，OPC′S），五聚体以上者称为高聚原花青素（Po1ymers Proanidins，PPC′s）。
沙棘（Hippophas rhamnoides L.）为胡颓子科（Elaeagnaceae）酸刺属的灌木或小乔木，含有丰富的低聚原花青素（OPC′S）。报道称OPC′S据有较强的抗氧化、清除自由基和改善人体微循环等功效。此外，还具有改善血管的生物化学性质、抗凝血、抗白内障、抗溃疡、防癌抗肿瘤等功效。
目前，对原花青素的提取精制有许多种方法，如溶剂浸提法、金属离子沉淀法、超临界萃取法、超声波浸提法、微波浸提法等。国内外工业上多采用溶剂浸提法，提取溶剂大多采用丙酮，考虑到溶剂的毒性。本文利用经超临界CO2萃取沙棘油后的沙棘籽渣为原料，以酒精为提取溶剂，采用树脂精制法工艺萃取其中的沙棘原花青素，来探索沙棘原花青素的最优提取条件。
1 材料与方法
1.1 原料与试剂
原料沙棘采自于宁夏六盘山地区，经超临界CO2萃取沙棘籽油后，将沙棘籽渣真空封装低温保存，所用试剂均为国产分析纯，大孔吸附树脂购于上海亚东核级树脂有限公司。
1.2 主要仪器
UV-2550紫外分光光度计（日本岛津）， RE-F20旋转蒸发仪（长城亚荣生化仪器厂），
HZ-9310K型全温振荡器（太仓市科技器材厂）DZG-6020型真空干燥箱（上海森信实验仪器有限公司），LD 5-10型医用离心机，北京医用离心机厂。
1.3 试验方法
1.3.1 原花青素提取工艺流程。
4500r/min
沙棘籽渣乙醇提取 提取液回收乙醇 浓缩液 离心 PC上清液-D3520
型树脂吸附水洗脱、乙醇洗脱洗脱液回收乙醇、真空干燥PC产品（混合物）
1.3.2 原花青素分离提取条件
参照文献方法，考虑到安全和实用的效果，选用大孔树脂D3520，以50%乙醇作为洗脱溶剂，料液比1∶8（w/v），在pH值5.1、30℃条件下，连续回流提取12h（60min/次）来分离纯化沙棘籽渣中原花青素。
1.3.3 大孔树脂的预处理
以95%乙醇浸泡24h，再用大量乙醇淋洗，然后以大量蒸馏水洗至无醇味。
1.3.4 原花青素的分离
1.3.4.1 大孔树脂层析分离
将离心后的浓缩液上D3520大孔树脂层析柱，以30%、50%、70%的乙醇水溶液进行阶梯度洗脱至流出液近无色。收集不同梯度的树脂水洗液和乙醇解吸液，真空浓缩后冷冻干燥称重，分别测定其原花青素含量，计算得率。
1.3.4.2 吸附率和解吸率的测定
参照文献[8]方法进行计算公式为：
吸附率=（提取液吸光值×提取液体积-滤液吸光值×滤液体积）/提取液吸光值×提取液体积
解吸率=解吸液吸光值×解吸液体积/（提取液吸光值×提取液体积-滤液吸光值×滤液体积）
1.3.5 原花青素含量的检测方法
采用正丁醇-盐酸法[8]测定。
2 结果
2.1 大孔树脂对原花青素的分离效果
选用30%、50%、70%的乙醇水溶液对原花青素制品进行梯度洗脱，结果显示D3520大孔树脂对原花青素的分离效果比较好，其中以50%乙醇溶液作为洗脱液洗脱效果较佳 洗脱液中原花青素含量可达71.86%。得率为30.40%。
2.2 大孔树脂对原花青素的吸附、解吸能力
根据实验结果，D3520大孔树脂对原花青素的吸附与解吸效果比较好，但不同的解吸液和不同浓度的解吸液的解吸效果不一样，这可能与原花青素的聚合度不同有关。
2.3 正交试验结果
根据单因子试验结果及生产成本，对影响D3520树脂柱分离原花青素的条件进行L9（33）正交优化试验。由试验结果可知，乙醇浓度、温度对提取效果有明显影响。由直观分析可得，确定D3520树脂的最佳分离条件是A2B1C2D2，即洗脱液为浓度70%乙醇， 提取温度30℃，提取时间60min/次，提取次数2次。
3 讨论
大孔树脂具有吸附容量大、选择性好、易解吸，易再生，成本低等优点。本试验在借鉴前人研究的基础上，采用性能较佳的D3520吸附树脂来分离沙棘籽渣中原花青素，其提取工艺较为简单，成本低，不存在有机溶剂毒性残留的问题，得到的最优提取条件是：料液比为1∶8、温度30℃、pH5.1、乙醇浓度50%、连续提取2次（60min/次）。在此条件下，原花青素含量和得率都较高，产品纯度39.18%，提取率达9.84%（以脱脂沙棘干重计）。
为了考察采用以上工艺提取和精制是否会导致原花青素的失活，应对该产品进行抗氧化活性研究。
参考文献
[1] 国植，徐莉.原花青素：具有广阔发展前景的植物藥[J].国外医药？植物药分册，1996，11（5）：196-197.
[2] 张冰若，劳业兴，苏薇薇.原花青素的研究现状及开发前景[J].中药材，2003，12（26）：905-908.
[3] 葛宜掌.金红茶多酚提取方法进展[J].精细化工，1994，11（4）：52-55.
[4] 陈继美，石庆琳，艾长荣.茶多酚抗氧自由基的作用及应用及进展[J].中国医院药学杂志，1997，17（12）：559-560.
[关键词]沙棘籽渣；原花青素；树脂；精制
中图分类号：TQ914.1 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2013）09-0101-01
原花青素（Procyanidins，PC）广泛存在于各种植物（如葡萄、山楂、苹果、沙棘等）的皮、核或种籽中，是一大类多酚类化合物的总称，由不同数量的儿茶素或表儿茶素结合而成。最简单的原花青素是由儿茶素与表儿茶素形成的二聚体，此外还有三聚体、四聚体，直至十聚体。按聚合度大小的不同，一般将二至四聚体者称为低聚原花青素（O1igomeric Proanthocyanidins，OPC′S），五聚体以上者称为高聚原花青素（Po1ymers Proanidins，PPC′s）。
沙棘（Hippophas rhamnoides L.）为胡颓子科（Elaeagnaceae）酸刺属的灌木或小乔木，含有丰富的低聚原花青素（OPC′S）。报道称OPC′S据有较强的抗氧化、清除自由基和改善人体微循环等功效。此外，还具有改善血管的生物化学性质、抗凝血、抗白内障、抗溃疡、防癌抗肿瘤等功效。
目前，对原花青素的提取精制有许多种方法，如溶剂浸提法、金属离子沉淀法、超临界萃取法、超声波浸提法、微波浸提法等。国内外工业上多采用溶剂浸提法，提取溶剂大多采用丙酮，考虑到溶剂的毒性。本文利用经超临界CO2萃取沙棘油后的沙棘籽渣为原料，以酒精为提取溶剂，采用树脂精制法工艺萃取其中的沙棘原花青素，来探索沙棘原花青素的最优提取条件。
1 材料与方法
1.1 原料与试剂
原料沙棘采自于宁夏六盘山地区，经超临界CO2萃取沙棘籽油后，将沙棘籽渣真空封装低温保存，所用试剂均为国产分析纯，大孔吸附树脂购于上海亚东核级树脂有限公司。
1.2 主要仪器
UV-2550紫外分光光度计（日本岛津）， RE-F20旋转蒸发仪（长城亚荣生化仪器厂），
HZ-9310K型全温振荡器（太仓市科技器材厂）DZG-6020型真空干燥箱（上海森信实验仪器有限公司），LD 5-10型医用离心机，北京医用离心机厂。
1.3 试验方法
1.3.1 原花青素提取工艺流程。
4500r/min
沙棘籽渣乙醇提取 提取液回收乙醇 浓缩液 离心 PC上清液-D3520
型树脂吸附水洗脱、乙醇洗脱洗脱液回收乙醇、真空干燥PC产品（混合物）
1.3.2 原花青素分离提取条件
参照文献方法，考虑到安全和实用的效果，选用大孔树脂D3520，以50%乙醇作为洗脱溶剂，料液比1∶8（w/v），在pH值5.1、30℃条件下，连续回流提取12h（60min/次）来分离纯化沙棘籽渣中原花青素。
1.3.3 大孔树脂的预处理
以95%乙醇浸泡24h，再用大量乙醇淋洗，然后以大量蒸馏水洗至无醇味。
1.3.4 原花青素的分离
1.3.4.1 大孔树脂层析分离
将离心后的浓缩液上D3520大孔树脂层析柱，以30%、50%、70%的乙醇水溶液进行阶梯度洗脱至流出液近无色。收集不同梯度的树脂水洗液和乙醇解吸液，真空浓缩后冷冻干燥称重，分别测定其原花青素含量，计算得率。
1.3.4.2 吸附率和解吸率的测定
参照文献[8]方法进行计算公式为：
吸附率=（提取液吸光值×提取液体积-滤液吸光值×滤液体积）/提取液吸光值×提取液体积
解吸率=解吸液吸光值×解吸液体积/（提取液吸光值×提取液体积-滤液吸光值×滤液体积）
1.3.5 原花青素含量的检测方法
采用正丁醇-盐酸法[8]测定。
2 结果
2.1 大孔树脂对原花青素的分离效果
选用30%、50%、70%的乙醇水溶液对原花青素制品进行梯度洗脱，结果显示D3520大孔树脂对原花青素的分离效果比较好，其中以50%乙醇溶液作为洗脱液洗脱效果较佳 洗脱液中原花青素含量可达71.86%。得率为30.40%。
2.2 大孔树脂对原花青素的吸附、解吸能力
根据实验结果，D3520大孔树脂对原花青素的吸附与解吸效果比较好，但不同的解吸液和不同浓度的解吸液的解吸效果不一样，这可能与原花青素的聚合度不同有关。
2.3 正交试验结果
根据单因子试验结果及生产成本，对影响D3520树脂柱分离原花青素的条件进行L9（33）正交优化试验。由试验结果可知，乙醇浓度、温度对提取效果有明显影响。由直观分析可得，确定D3520树脂的最佳分离条件是A2B1C2D2，即洗脱液为浓度70%乙醇， 提取温度30℃，提取时间60min/次，提取次数2次。
3 讨论
大孔树脂具有吸附容量大、选择性好、易解吸，易再生，成本低等优点。本试验在借鉴前人研究的基础上，采用性能较佳的D3520吸附树脂来分离沙棘籽渣中原花青素，其提取工艺较为简单，成本低，不存在有机溶剂毒性残留的问题，得到的最优提取条件是：料液比为1∶8、温度30℃、pH5.1、乙醇浓度50%、连续提取2次（60min/次）。在此条件下，原花青素含量和得率都较高，产品纯度39.18%，提取率达9.84%（以脱脂沙棘干重计）。
为了考察采用以上工艺提取和精制是否会导致原花青素的失活，应对该产品进行抗氧化活性研究。
参考文献
[1] 国植，徐莉.原花青素：具有广阔发展前景的植物藥[J].国外医药？植物药分册，1996，11（5）：196-197.
[2] 张冰若，劳业兴，苏薇薇.原花青素的研究现状及开发前景[J].中药材，2003，12（26）：905-908.
[3] 葛宜掌.金红茶多酚提取方法进展[J].精细化工，1994，11（4）：52-55.
[4] 陈继美，石庆琳，艾长荣.茶多酚抗氧自由基的作用及应用及进展[J].中国医院药学杂志，1997，17（12）：559-560.