细菌—酵母穿梭表达质粒pGBKT7—MIF的构建及转化

来源 :中山医科大学学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户：NK123456

【摘要】

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[目的]构建并转化能在酵母菌AH109中表达巨噬细胞游走抑制因子(MIF)的穿梭表达质粒pGBKT7-MIF.[方法]用RT-PCR方法从人T淋巴细胞中扩增MIF基因全外显子片段,并定向克隆入细菌

【作者】

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单志新余细勇林秋雄符永恒谭虹虹林曙光

【机构】

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广东省心血管病研究所分子药理室

【出处】

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中山医科大学学报

【发表日期】

：

2002年5期

【关键词】

：

巨噬细胞游走抑制因子质粒pGBKT7 分子克隆 macrophage migration inhibitory factors plasmid pGBKT7

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[目的]构建并转化能在酵母菌AH109中表达巨噬细胞游走抑制因子(MIF)的穿梭表达质粒pGBKT7-MIF.[方法]用RT-PCR方法从人T淋巴细胞中扩增MIF基因全外显子片段,并定向克隆入细菌-酵母穿梭表达质粒pGBKT7中;用PEG/LiAC法将pGBKT7-MIF转化感受态酵母菌AH109.提取转化酵母菌的质粒DNA,转化大肠杆菌并行质粒的酶切鉴定.[结果]扩增出人MIF cDNA片段,限制性内切酶酶切和DNA测序证实获得正确的重组质粒pGBKT7-MIF;获得可在色氨酸缺陷培养基(SD/-trp

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