探讨E2F1转录因子对小鼠全层皮肤缺损创面中M2型巨噬细胞的调节机制。
方法引进E2F1基因敲除杂合子C57BL/6小鼠、野生型C57BL/6小鼠，自行繁殖并于小鼠出生后2周通过PCR法鉴定出E2F1基因敲除纯合子小鼠和野生型小鼠。采用随机数字表法分别选取12只经鉴定后生长至6～8周龄的雄性E2F1基因敲除纯合子C57BL/6小鼠、野生型C57BL/6小鼠，设为E2F1基因敲除组与野生型组，在每只小鼠背部制成1个全层皮肤缺损创面。伤后2、7 d，每组分别采用随机数字表法选取6只小鼠处死，切取创面组织，采用免疫荧光法观察CD68和CD206双阳性M2型巨噬细胞表达并计算CD206阳性细胞百分比，蛋白质印迹法检测CD206蛋白表达，实时荧光定量反转录PCR(RT－PCR)法检测精氨酸酶1 mRNA表达。另取2组伤后7 d创面组织标本，分别采用蛋白质印迹法和实时荧光定量RT－PCR法检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR－γ)的蛋白和mRNA表达。前述实验均重复4次。另取野生型组小鼠伤后7 d创面组织标本3个，采用免疫共沉淀法及蛋白质印迹法检测E2F1与PPAR－γ的关系，重复2次。对数据行非配对t检验。
结果E2F1基因敲除纯合子C57BL/6小鼠和野生型C57BL/6小鼠PCR产物大小分别为227、172 bp，与所设计DNA片段大小一致。伤后2、7 d，与野生型组比较，E2F1基因敲除组小鼠创面组织中CD68和CD206双阳性M2型巨噬细胞较多；与野生型组的(0.129±0.017)%、(0.282±0.071)%比较，E2F1基因敲除组小鼠创面组织中CD206阳性细胞百分比[(0.234±0.032)%、(0.584±0.023)%]明显增加(t＝3.29、3.54，P<0.05)。伤后2、7 d，与野生型组的0.43±0.06、0.97±0.08比较，E2F1基因敲除组小鼠创面组织中CD206蛋白表达(1.00±0.23、1.63±0.26)明显增加(t＝2.41、2.45，P<0.05)。伤后2、7 d，与野生型组的0.163±0.026、0.108±0.017比较，E2F1基因敲除组小鼠创面组织中精氨酸酶1 mRNA表达(0.482±0.105、0.195±0.031)明显增加(t＝3.04、2.86，P<0.05)。伤后7 d，与野生型组的0.20±0.04、0.20±0.04比较，E2F1基因敲除组小鼠创面组织中PPAR－γ蛋白与mRNA表达(0.61±0.12、0.51±0.13)均明显增加(t＝3.36、2.86，P<0.05)。伤后7 d，野生型组小鼠创面组织检测显示，PPAR－γ对E2F1存在单向作用。
结论E2F1转录因子通过抑制PPAR－γ的表达影响M2型巨噬细胞的极化，从而抑制小鼠全层皮肤缺损创面愈合过程。