莱菔硫烷通过调控miR-34a/SIRT1对喉癌Hep-2细胞增殖和凋亡的影响

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目的:探讨莱菔硫烷(SFN)对喉癌Hep-2细胞增殖及凋亡的影响,并分析其对微小RNA-34a(miR-34a)/沉默信息调节因子1(SIRT1)的调控作用。方法:体外培养喉癌Hep-2细胞,并将其分为5组:空白对照组(未进行任何处理)、si-NC组(加入阴性对照质粒)、RNAi组(加入si-miR-34a)、SFN组(加入SFN)、SFN+RNAi组(RNAi组基础上加入SFN)。采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-34a与SIRT1 mRNA表达水平;细胞增殖/毒性实验(CCK-8)检测SFN对Hep-2细胞增殖能力的影响; Hoechst染色法检测细胞凋亡;流式细胞仪检测细胞周期;蛋白印迹(WB)法检测SIRT1、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白(Bax)、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cleaved caspase-3)蛋白表达。双荧光素酶报告实验验证miR-34a与SIRT1的靶标关系。结果:SFN浓度为20μmol·L-1时可明显抑制喉癌Hep-2细胞增殖(P <0. 05);与空白对照组、si-NC组相比,RNAi组miR-34a表达水平、细胞增殖抑制率、细胞凋亡率、Bax、cleaved caspase-3蛋白表达量均显著降低,而SFN组则显著升高(P <0. 05); RNAi组SIRT1 mRNA和蛋白表达、Bcl-2蛋白表达水平均显著升高,而SFN组显著降低(P <0. 05);双荧光素酶报告实验显示SIRT1是miR-34a的靶基因。不同组别细胞周期差异具统计学意义(P <0. 05)。结论:SFN可明显抑制喉癌Hep-2细胞增殖并诱导细胞凋亡,其可能通过调控miR-34a/SIRT1表达而发挥作用。
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