淋巴结组织制片中常见问题与对策

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  病理常规制片技术是病理诊断的基础。切片质量是指导医师作出准确诊断的重要保证。在制片时,会遇到许多问题,如切片时出现裂痕、皱褶、破碎;染色过深或过浅等。特别是淋巴结组织,由于淋巴结组织细胞成分丰富,间质少,外周有一层较致密的结缔组织被膜【sup】[1]【/sup】,这样的结构特征决定了淋巴组织的常规制片必须遵循“薄切、淡染”的原则。笔者通过摸索和实践,针对淋巴结组织制片时出现这些的常见问题的原因加以分析,总结出了一些经验和体会。
  
  首先对组织切片产生裂隙的原因经行实验分析
  材料:本院手术切除的淋巴结样本30例,取材厚度均为0.2~0.3cm,厚薄均匀,采用ZT-12P全自动脱水机进行固定、脱水、透明、浸蜡、包埋机包埋。采用手工染色,主要试剂:Baso苏木素-伊红染液、0.5%盐酸乙醇分化液。
  方法:将30例样本每个样本分别制成两个蜡块,然后均分为A、B两组;A组30例蜡块常规置于冷台冷却后,按报道【sup】[2]【/sup】直接切片厚度为3μm。B组30例蜡块置于冷台冷却后,将蜡块修到最大面时用拇指捂5~6秒再切片,厚度为3μm。A、B两组切片展片时水温均控制在40℃左右即可,过高小皱褶打不开;过低则切片不平坦、贴片不牢易脱片;最后同时染色。
  结果:B组切片效果较好、片子完整、结构完好,镜下组织无裂隙、且连片。
  
  染色时间的实验分析
  将B组每个蜡块分别切3张,然后均分为①②③3组用新鲜苏木素分别进行5、8、10分钟染色,用0.5%盐酸乙醇分化15秒。伊红染色30秒。常规脱水、透明、封固。
  苏木素染色5分钟的①组染色效果最好,颜色鲜艳,均匀,胞核、胞质清晰,这与报道的一致【sup】[3]【/sup】。
  
  讨 论
  在淋巴组织疾病的研究中,石蜡切片,HE染色仍是临床病理诊断中最为实用、简便的方法。为了减少或纠正组织切片的裂隙、和解决染色效果不佳的问题,提如下建议。
  组织处理时,标本取材0.2~0.3cm为宜,厚薄要均匀;最好选用4%中性缓冲甲醛液作为常规组织固定液,并且适当延长固定时间。
  切片时,拧固刀座,夹紧刀片,防止因机械部分松动而出现切片裂隙,蜡块冷冻后不易立即切片,应将蜡块修到最大面后用拇指捂4~5秒后切片。
  裱片时水温以40℃左右为宜,以免因水温过高,造成切片扩散,形成人为裂隙。
  染色时间比常规HE染色、苏木素染色的时间约缩短了一半。大约为5分钟。此时制出的淋巴组织切片平整,结构完好,镜下观察裂隙明显减少或消除,组织细胞核浆对比明显,色彩鲜艳,在高倍镜下可以清晰地观察核膜、核仁和染色质等细微结构。这样能够获得更优良的HE染色切片,从而为临床病理诊断医师做出准确的诊断提供重要保障。
  
  参考文献
  1 王德田,罗玉凤,曹金伶,等.如何制作精良的淋巴结组织切片[J].诊断病理学杂志,2005,12(4):314.
  2 康源,刘卫平.淋巴结常规制片技术体会[J].临床与实验病理学杂志,2008,24(2):235-236.
  3 姜冰,杨军,彭长缨.淋巴结片子染色中苏木精染色时间的探讨[J].诊断病理學杂志,2010,17(3):238.
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