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为建立一种同时检测猪轮状病毒(PRoV)、猪札幌病毒(PoSaV)和猪星状病毒(PAstY)的三重PCR方法,本研究参考PRoV的VP6基因、PoSaV的RdRp基因以及PAstY的ORF1基因序列分别设计特异性引物,通过特异性、敏感性、重复性试验优化反应条件,建立了快速鉴别PRoV、PoSaV和PAstY的三重PCR方法.试验表明,该方法能特异性扩增PRoV、PoSaV、PAstY的目的片段,对猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)等常见猪病病毒的检测结果均为阴性,特异性良好;PRoV、PoSaV和PAstV的检测限量分别为1.38× 102、8.33×102和4.40× 103拷贝数/μL,具有较好的敏感性.利用三重PCR和单重PCR方法同时对80份规模化猪场的临床腹泻样品进行检测,结果表明,3种病毒的样品阳性率均为5.00％,2种方法的检测结果相一致.本研究成功建立了同时PRoV、PoSaV和PAstY的三重PCR检测方法,可用于三种病原感染的临床鉴别诊断.