从黑曲霉CICC2462中扩增得到木聚糖酶基因xynB的成熟肽编码序列(746 bp),并针对黑曲霉CICC2462中高表达的糖化酶基因位点,通过重叠延伸PCR将xynB基因片段与糖化酶基因的5’同源臂、3’同源臂进行拼接得到同源重组表达框GBG,将其定向插入表达载体pSZH-CYM中,构建黑曲霉表达载体pSZH-xynB。将载体pSZH-xynB通过冻融法转化农杆菌AGL1,通过农杆菌介导法转化黑曲霉CICC2462菌丝体。经潮霉素筛选和PCR鉴定获得47株重组菌株,并从其中12株中筛选出在糖化酶基因位点发生基因置换的同源重组菌株9株。而后通过连续传代、筛选和PCR检测,获得消除潮霉素基因的纯合的同源重组菌株,获得符合食品级生产要求的工程菌。对工程菌进行发酵培养、酶活性检测和SDS-PAGE分析,表明在糖化酶摇瓶发酵条件下,工程菌培养液上清的木聚糖酶活性高达4 495.8975 U·mL-1。研究结果为生产低木糖苷酶活性的内切木聚糖酶提供新途径,为利用黑曲霉表达系统安全高效地生产其他酶制剂和重组蛋白提供参考。