【摘 要】
：
【目的】通过构建假交替单胞菌(Pseudoalteromonassp.DL-6)低温几丁质酶(chitinaseA,chi A;chitinase C, chi C)的重组乳酸克鲁维酵母菌株、纯化重组蛋白并对其进行酶学性质
【机 构】
：
大连大学生命科学与技术学院; 辽宁省海洋微生物工程技术研究中心;
【基金项目】
：
国家自然科学基金(31500039);辽宁省博士启动基金指导计划(20170520167);大连市青年科技之星项目(2017RQ155);大连大学博士专项基金(2017QL020);辽宁省自然科学基金(20180550728)~~
论文部分内容阅读
【目的】通过构建假交替单胞菌(Pseudoalteromonassp.DL-6)低温几丁质酶(chitinaseA,chi A;chitinase C, chi C)的重组乳酸克鲁维酵母菌株、纯化重组蛋白并对其进行酶学性质表征,为低温几丁质酶潜在工业化生产几丁寡糖奠定理论基础。【方法】人工合成密码子优化的几丁质酶基因,构建重组乳酸克鲁维酵母表达质粒(p KLAC1-chi A、p KLAC1-chi C)并用电脉冲法转化到乳酸克鲁维酵母中,实现低温几丁质酶的可溶表达。利用镍柱亲和层析纯化得到高纯度的重组几丁质酶。【结果】成功构建产低温几丁质酶的重组乳酸克鲁维酵母并纯化获得高纯度的重组几丁质酶。经SDS-PAGE分析在110 k Da与90 k Da附近出现符合预期大小的蛋白条带。铁氰化钾法测得Chi A和Chi C的酶活分别为51.45 U/mg与108.56 U/mg。最适反应温度分别为20°C和30°C,最适p H分别为8.0和9.0。在低于40°C,p H 8.0–12.0时,Chi A和Chi C重组酶较稳定。Chi A和Chi C对胶体几丁质以及粉状底物α-几丁质与β-几丁质具有明显的降解活性,且具有一定协同降解能力。【结论】首次实现假交替单胞菌来源的低温几丁质酶在乳酸克鲁维酵母中的重组表达、纯化、酶学性质及其降解产物分析,为其他低温几丁质酶的研究提供借鉴意义。
其他文献
甘蓝夜蛾属鳞翅目，夜蛾科，又称甘蓝夜盗蛾。各省均有发生。杂食性，危害多种蔬菜，以甘蓝、白菜为主，给蔬菜生产带来极大损失，
基于能源合理有效利用的观点,运用数据库管理系统、面向对象的编程技术和三维机械设计及其图像处理技术,对15.7MW大容量新型热油蒸汽热风一体化炉进行了三维开发设计分析与编
通过固相合成法制备硫化镉/聚苯胺复合材料。通过X射线衍射、扫描电镜和红外光谱对其进行了表征,并通过实验检测了它的光催化性能。结果显示,制备的硫化镉/聚苯胺复合材料对
目的探讨硫辛酸对老龄鼠衰老进程的延缓性。方法测试清除自由基的酶和非酶抗氧化剂的水平，所测的抗氧化剂来自施用DL-α-硫辛酸青老龄鼠的肝肾器官。结果实验已观察到在肝肾器
肌骨超声是近年来发展迅速,应用广泛的一门技术。对肌骨超声的需求不断增长,导致相关专业的临床教学面临更大的压力,医生要有足够的技能来满足这一需求。运动医学课程是一门
为了贯彻落实<中共中央关于进一步加强和改进学校德育工作的若干意见>,根据高等学校物理课程的特点,介绍在学科教学中与德育有机结合,向大学生进行爱国主义教育的必要性、做
本文对目前信息技术教育网站的现状作了简要分析，并对当前信息技术教育网站的建设情况做了理性的思考与探讨。
基于信息安全专业的发展趋势和我国信息化建设需求，分析该学科建设中存在的问题，结合桂林电子科技大学的教学实践，从信息安全专业的课程体系、软硬件平台、实践体系和师资培训等
现阶段,随着中国电力事业的不断发展,对可靠性较高的基础设施也变得更加依赖。为了确保220 kV及以上电压输电线路的安全运行,电力企业应该不断完善电力系统应用过程中的服务
1990～1992年,在山西省北部旱作条件下,对从国际马铃薯中心(CIP)引入的44份材料和国内10个抗旱品种进行了抗旱鉴定和评价。结果表明,经济性状表现好、高产抗旱的品种为乌盟851