【摘 要】
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目的进行重组人白细胞介素-6(rhIL-6)的批量生产研究。方法将克隆的人IL-6基因置于pET30a载体的T7启动子下游,在宿主大肠杆菌中进行表达。结果工程菌表达量占菌体总蛋白的50%
【机 构】
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中国医学科学院、中国协和医科大学 基础医学研究所,中国医学科学院、中国协和医科大学 基础医学研究所,中国医学科学院、中国协和医科大学 基础医学研究所,中国医学科学院、中国协和医科大学 基础医学研究所,
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目的进行重组人白细胞介素-6(rhIL-6)的批量生产研究。方法将克隆的人IL-6基因置于pET30a载体的T7启动子下游,在宿主大肠杆菌中进行表达。结果工程菌表达量占菌体总蛋白的50%以上,纯品纯度大于95%,rhIL-6的分子量为21 000,等电点为6.7。用依赖IL-6的小鼠杂交瘤细胞系7TD1以MTT比色法测定表达蛋白生物活性表明,rhIL-6的ED50为0.35 ng/ml。结论上述结果表明rhIL-6已基本达到中试生产的要求。
Objective To study the mass production of recombinant human interleukin-6 (rhIL-6). Methods The cloned human IL-6 gene was placed downstream of T7 promoter of pET30a vector and expressed in host E. coli. Results The expression of engineering bacteria accounted for more than 50% of the total bacterial protein, pure purity greater than 95%, rhIL-6 molecular weight of 21 000, isoelectric point of 6.7. The bioassay of the expressed protein by MTT colorimetric assay using IL-6-based mouse hybridoma cell line 7TD1 showed that the ED50 of rhIL-6 was 0.35 ng / ml. Conclusion The above results show that rhIL-6 has basically reached the pilot production requirements.
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