降钙素原的克隆表达及多克隆抗体制备

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目的克隆表达与纯化降钙素原(PCT),制备多克隆抗体,为其单抗制备及在临床上的应用研究提供有用的实验基础。方法培养人甲状腺髓伴癌细胞株(TT细胞)提取总RNA进行RT-PCR获取PCT的全长基因,构建pET-PCT重组质粒,转化至DE3经IPTG诱导表达出融合蛋白,纯化并进行10%聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、质谱测序,融合蛋白免疫兔制备多抗,采用ELISA和Western-blot进行鉴定。结果成功获得PCT全长基因,10%SDS-PAGE电泳和质谱测序证明表达的融合蛋白为PCT,成功制备了PCT多抗。结论成功获得PCT的全长基因,表达出融合蛋白并制备多抗,为研究PCT的病理、生理作用及功能奠定基础,为PCT的单抗制备及在临床应用研究提供了有用的实验材料。
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