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摘要[目的]比较中国对虾与日本对虾对白斑综合征病毒的耐受力，为WSSV的病害防治提供参考。[方法]在盐度30‰和（24±2）℃下，将体长约8～9 cm的中国对虾（Fenneropenaeus chinensi）与日本对虾（Marsupenaeus japonicus）停食48 h后，投喂感染白斑综合征病毒（WSSV）的死亡对虾，观察其摄食及感染情况，比较这2种虾的对WSSV耐受力。[结果]中国对虾的平均死亡率为63.33%，发病高峰期为4～5 d，而日本对虾的平均死亡率为54.44%，发病高峰期为5～7 d，中国对虾的发病率于日本对虾，发病时间也较日本对虾早。[结论]中国对虾对WSSV的耐受能力要强于日本对虾。
关键词中国对虾；日本对虾；WSSV；耐受能力
中图分类号S945.4文献标识码A文章编号0517-6611（2016）13-171-02
白斑综合征（WSD）是危害对虾健康养殖的主要病症[1-2]。近几年，山东省内对虾白斑综合征病毒（White spot syndrome virus，WSSV）监测表明WSD总体样品阳性率超过20%，对对虾养殖具有重大风险。中国对虾（Fenneropenaeus chinensis）和日本对虾（Marsupenaeus japonicus）为主要养殖种类，但日本对虾WSSV的检出率低于中国对虾，成功养殖率也高于中国对虾。研究表明，对虾的死亡时间因不同种类、感染方式和感染剂量而异[3-4]。孙成波等[5]研究发现凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei）和斑节对虾（Penaeus monodon Fabricius）在人工感染条件下其病毒复制时间及抵抗力存在差异。笔者比较了中国对虾和日本对虾对WSSV的耐受力，探讨日本对虾较中国对虾低WSSV携带率及发病率的原因，以期为WSSV的病害防治提供参考。
1材料与方法
1.1材料
健康中国对虾和日本对虾取自昌邑示范基地未发病虾池，体长约8～9 cm。试验前随机抽取2种对虾各10尾，采用二步PCR法检测WSSV，检测结果均为阴性，在水族箱暂养7 d，2种对虾保持养殖环境一致，每天投喂2次配合饲料或鲜活饵料，每天换水1次。
1.2方法
试验用海水为经厚沙层过滤的天然海水，盐度为30‰，温度（24±2）℃。试验用水泥池长1.0 m、宽0.5 m、高0.5 m，试验前用20 g/m3的漂白精消毒处理。养殖期间每天吸污2次，换水1次，换水量30%左右。
1.2.1感染死亡对虾的制备。取实验室自制感染WSSV的死亡对虾，投喂前采用荧光实时定量PCR仪分析对虾肌肉中的WSSV，选出2尾对虾WSSV含量为109拷贝/g的对虾，以备投喂。
1.2.2
中国对虾对WSSV的耐受力测定。每个水泥池饲养120尾健康中国对虾，停食48 h后，每个水泥投入1尾感染WSSV死亡的中国对虾，观察中国对虾的摄食情况，及时捞出头胸甲出现白斑WSSV发病症状的中国对虾，记录捞出的每尾虾的发病时间，直至感染WSSV的中国对虾被吃完。同时，设置1个空白对照，饲养120尾健康的中国对虾，不投喂感染的对虾。
1.2.3
日本对虾对WSSV的耐受力测定。每个水泥池饲养120尾健康日本对虾，停食48 h 后，每个水泥池投入1尾感染WSSV死亡的日本对虾，观察日本对虾的摄食情况，及时捞出头胸甲出现白斑WSSV发病症状的日本对虾，记录捞出的每尾虾的发病时间，直至感染WSSV的日本对虾被吃完。同时，设置1个空白对照，饲养120尾健康日本对虾，不投喂感染的对虾。
1.3数据统计
比较中国对虾与日本对虾对投喂病虾后感染发病数量和发病时间，分析二者对WSSV耐受力的差异。
2结果与分析
2.1投喂病虾后中国对虾感染死亡数量及死亡率
由表1可知，投喂1尾死虾后，试验组76尾中国对虾出现感染症状，经检测均携带WSSV，感染率为63.33%。中国对虾感染发病高峰期集中于第4～5天，日发病数量约35尾/d。对照组死亡4尾对虾，通过分子生物学检测未检测到WSSV，可排除因为病毒感染致死的可能。
2.2投喂病虾后日本对虾死亡数量及死亡率
由表2可知，投喂1尾死虾后，试验组65尾日本对虾均出现白斑感染症状，经检测均带有WSSV，感染率为54.44%。日本对虾感染发病高峰期集中于5～7 d，日发病数量约20～30尾/d，其感染时间较中国对虾要晚，感染数量要低于中国对虾。对照组日本对虾未出现死亡状况。
3结论与讨论
该试验投喂1尾死亡对虾后，中国对虾的平均死亡率为63.33%，发病高峰期在4～5 d，而日本对虾的平均死亡率为54.44%，发病高峰期在5～7 d，中国对虾的发病率高于日本对虾，发病时间也比日本对虾早，其原因可能有以下方面：
①摄食时间差异。
中国对虾具有连续摄食的特点，日本对虾白天潜伏在池底很少活动，日落后摄食[6]，因此同时投喂死虾后其摄食死虾的时间不同，被感染时间也不同。
②种间形态差异。
中国对虾甲壳较薄，死虾容易被摄食，而日本对虾甲壳厚，死虾不易被摄食，病毒传播较慢。不同种类的对虾感染病毒后的存活时间存在差异[7]。李素红等[8]研究也表明即使同一种属不同家系之间的中国对虾，对WSSV的敏感性也存在较大差异。中国对虾和日本对虾属于不同种，对WSSV抗性不一，因而耐受时间不一。
③饵料差异。
对虾体内存在众多的抗病因子（如各种水解酶、溶解酶、抗菌肽等），具有相当的抗病能力，饵料不同会造成抗病因子也存在差异[9]。中国对虾对蛋白需求（40%）较日本对虾（60%）要低。Pascual等[10]报道当对虾摄食蛋白含量40%的饲料时，一些免疫指标（血淋巴细胞总数、基础和激活的呼吸爆发）显著高于摄食蛋白含量为5%和15%的饲料。刘栋辉等[11]报道当饲料蛋白含量为20%时，凡纳滨对虾的血淋巴指标（如细胞总数、酚氧化敏活性、血蓝蛋白和血淋巴蛋白）均显著较低。这些非特异免疫指标的高低可反映虾的免疫状况，影响对虾对病毒的抵抗力。饲养日本对虾以投喂蓝蛤等动物性饵料为主，蛋白质含量高，而饲养中国对虾多投喂配合饲料，蛋白质含量较低，因此饵料的差异可能是导致中国对虾和日本对虾对WSSV耐受力不同的重要因素。
参考文献
[1] 何建国，翁少萍，邓敏，等.斑节对虾白斑病病原与病理[J].中山大学学报论丛（自然科学版），1996（S1）：12-15.
[2] 何建国，莫福.对虾白斑综合症病毒爆发流行与传播途径、气候和水体理化因子的关系及其控制措施[J].中国水产，1999（7）：34-41.
[3] 江世贵，何建国，吕玲，等.白斑综合症病毒对斑节对虾亲虾的感染及垂直传播的初步研究[J].中山大学学报（自然科学版），2000，39（S1）：164-171.
[4] 江世贵，何建国，马之明，等.白斑综合症病毒对斑节对虾幼体和仔虾的致病性[J].中山大学学报（自然科学版），2000，39（S1）：172-176.
[5] 孙成波，何建国，黎子兰，等.凡纳滨对虾和斑节对虾对WSSV敏感性的比较[J].湛江海洋大学学报，2006，26（3）：17-20.
[6] 陈宗尧，王克行.实用对虾养殖技术[M].北京：农业出版社，1987：11-13.
[7] 张天时，李素红，孔杰，等.中国对虾自然感染与人工感染WSSV抗病力的比较[J].海洋与湖沼，2010，41（5）：763.
[8] 李素红，张天时，孟宪红，等.中国对虾杂交优势对自然感染白斑综合征病毒的抗病力分析[J].水产学报，2007，31（1）：69-71.
[9] SODERHALL K.Invertebrate immunity [J].Dev Comp Immunol，1999，23（4/5）：413-421.
[10] PASCUAL C，ZENTENOB E，CUZONC G，et al.Litopenaeus vannamei juveniles energetic balance and immunological response to dietary protein[J].Aquaculture，2004，236：431-450.
[11] 刘栋辉，何建国，刘永坚，等.极低盐度下饲料蛋白质量分数对凡纳滨对虾生长表现和免疫状况的影响[J].中山大学学报（自然科学版），2005，44（S1）：217-222.
关键词中国对虾；日本对虾；WSSV；耐受能力
中图分类号S945.4文献标识码A文章编号0517-6611（2016）13-171-02
白斑综合征（WSD）是危害对虾健康养殖的主要病症[1-2]。近几年，山东省内对虾白斑综合征病毒（White spot syndrome virus，WSSV）监测表明WSD总体样品阳性率超过20%，对对虾养殖具有重大风险。中国对虾（Fenneropenaeus chinensis）和日本对虾（Marsupenaeus japonicus）为主要养殖种类，但日本对虾WSSV的检出率低于中国对虾，成功养殖率也高于中国对虾。研究表明，对虾的死亡时间因不同种类、感染方式和感染剂量而异[3-4]。孙成波等[5]研究发现凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei）和斑节对虾（Penaeus monodon Fabricius）在人工感染条件下其病毒复制时间及抵抗力存在差异。笔者比较了中国对虾和日本对虾对WSSV的耐受力，探讨日本对虾较中国对虾低WSSV携带率及发病率的原因，以期为WSSV的病害防治提供参考。
1材料与方法
1.1材料
健康中国对虾和日本对虾取自昌邑示范基地未发病虾池，体长约8～9 cm。试验前随机抽取2种对虾各10尾，采用二步PCR法检测WSSV，检测结果均为阴性，在水族箱暂养7 d，2种对虾保持养殖环境一致，每天投喂2次配合饲料或鲜活饵料，每天换水1次。
1.2方法
试验用海水为经厚沙层过滤的天然海水，盐度为30‰，温度（24±2）℃。试验用水泥池长1.0 m、宽0.5 m、高0.5 m，试验前用20 g/m3的漂白精消毒处理。养殖期间每天吸污2次，换水1次，换水量30%左右。
1.2.1感染死亡对虾的制备。取实验室自制感染WSSV的死亡对虾，投喂前采用荧光实时定量PCR仪分析对虾肌肉中的WSSV，选出2尾对虾WSSV含量为109拷贝/g的对虾，以备投喂。
1.2.2
中国对虾对WSSV的耐受力测定。每个水泥池饲养120尾健康中国对虾，停食48 h后，每个水泥投入1尾感染WSSV死亡的中国对虾，观察中国对虾的摄食情况，及时捞出头胸甲出现白斑WSSV发病症状的中国对虾，记录捞出的每尾虾的发病时间，直至感染WSSV的中国对虾被吃完。同时，设置1个空白对照，饲养120尾健康的中国对虾，不投喂感染的对虾。
1.2.3
日本对虾对WSSV的耐受力测定。每个水泥池饲养120尾健康日本对虾，停食48 h 后，每个水泥池投入1尾感染WSSV死亡的日本对虾，观察日本对虾的摄食情况，及时捞出头胸甲出现白斑WSSV发病症状的日本对虾，记录捞出的每尾虾的发病时间，直至感染WSSV的日本对虾被吃完。同时，设置1个空白对照，饲养120尾健康日本对虾，不投喂感染的对虾。
1.3数据统计
比较中国对虾与日本对虾对投喂病虾后感染发病数量和发病时间，分析二者对WSSV耐受力的差异。
2结果与分析
2.1投喂病虾后中国对虾感染死亡数量及死亡率
由表1可知，投喂1尾死虾后，试验组76尾中国对虾出现感染症状，经检测均携带WSSV，感染率为63.33%。中国对虾感染发病高峰期集中于第4～5天，日发病数量约35尾/d。对照组死亡4尾对虾，通过分子生物学检测未检测到WSSV，可排除因为病毒感染致死的可能。
2.2投喂病虾后日本对虾死亡数量及死亡率
由表2可知，投喂1尾死虾后，试验组65尾日本对虾均出现白斑感染症状，经检测均带有WSSV，感染率为54.44%。日本对虾感染发病高峰期集中于5～7 d，日发病数量约20～30尾/d，其感染时间较中国对虾要晚，感染数量要低于中国对虾。对照组日本对虾未出现死亡状况。
3结论与讨论
该试验投喂1尾死亡对虾后，中国对虾的平均死亡率为63.33%，发病高峰期在4～5 d，而日本对虾的平均死亡率为54.44%，发病高峰期在5～7 d，中国对虾的发病率高于日本对虾，发病时间也比日本对虾早，其原因可能有以下方面：
①摄食时间差异。
中国对虾具有连续摄食的特点，日本对虾白天潜伏在池底很少活动，日落后摄食[6]，因此同时投喂死虾后其摄食死虾的时间不同，被感染时间也不同。
②种间形态差异。
中国对虾甲壳较薄，死虾容易被摄食，而日本对虾甲壳厚，死虾不易被摄食，病毒传播较慢。不同种类的对虾感染病毒后的存活时间存在差异[7]。李素红等[8]研究也表明即使同一种属不同家系之间的中国对虾，对WSSV的敏感性也存在较大差异。中国对虾和日本对虾属于不同种，对WSSV抗性不一，因而耐受时间不一。
③饵料差异。
对虾体内存在众多的抗病因子（如各种水解酶、溶解酶、抗菌肽等），具有相当的抗病能力，饵料不同会造成抗病因子也存在差异[9]。中国对虾对蛋白需求（40%）较日本对虾（60%）要低。Pascual等[10]报道当对虾摄食蛋白含量40%的饲料时，一些免疫指标（血淋巴细胞总数、基础和激活的呼吸爆发）显著高于摄食蛋白含量为5%和15%的饲料。刘栋辉等[11]报道当饲料蛋白含量为20%时，凡纳滨对虾的血淋巴指标（如细胞总数、酚氧化敏活性、血蓝蛋白和血淋巴蛋白）均显著较低。这些非特异免疫指标的高低可反映虾的免疫状况，影响对虾对病毒的抵抗力。饲养日本对虾以投喂蓝蛤等动物性饵料为主，蛋白质含量高，而饲养中国对虾多投喂配合饲料，蛋白质含量较低，因此饵料的差异可能是导致中国对虾和日本对虾对WSSV耐受力不同的重要因素。
参考文献
[1] 何建国，翁少萍，邓敏，等.斑节对虾白斑病病原与病理[J].中山大学学报论丛（自然科学版），1996（S1）：12-15.
[2] 何建国，莫福.对虾白斑综合症病毒爆发流行与传播途径、气候和水体理化因子的关系及其控制措施[J].中国水产，1999（7）：34-41.
[3] 江世贵，何建国，吕玲，等.白斑综合症病毒对斑节对虾亲虾的感染及垂直传播的初步研究[J].中山大学学报（自然科学版），2000，39（S1）：164-171.
[4] 江世贵，何建国，马之明，等.白斑综合症病毒对斑节对虾幼体和仔虾的致病性[J].中山大学学报（自然科学版），2000，39（S1）：172-176.
[5] 孙成波，何建国，黎子兰，等.凡纳滨对虾和斑节对虾对WSSV敏感性的比较[J].湛江海洋大学学报，2006，26（3）：17-20.
[6] 陈宗尧，王克行.实用对虾养殖技术[M].北京：农业出版社，1987：11-13.
[7] 张天时，李素红，孔杰，等.中国对虾自然感染与人工感染WSSV抗病力的比较[J].海洋与湖沼，2010，41（5）：763.
[8] 李素红，张天时，孟宪红，等.中国对虾杂交优势对自然感染白斑综合征病毒的抗病力分析[J].水产学报，2007，31（1）：69-71.
[9] SODERHALL K.Invertebrate immunity [J].Dev Comp Immunol，1999，23（4/5）：413-421.
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[11] 刘栋辉，何建国，刘永坚，等.极低盐度下饲料蛋白质量分数对凡纳滨对虾生长表现和免疫状况的影响[J].中山大学学报（自然科学版），2005，44（S1）：217-222.