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根据烟草根黑腐病菌(Thielaviopsis basicola)与其它烟草病原真菌核糖体基因转录间隔区(internal transcribed spa-cer,ITS)序列间的差异,设计了一对特异性引物TB-5/TB-3,用于T.basicola的分子检测。利用该对引物对包括T.basi-cola在内的13个烟草病原菌菌株的基因组DNA进行PCR扩增,结果表明:只有T.basicola能扩增到一条400bp左右的特异性条带,其它菌株及阴性对照均无扩增产物。对烟草组织和土壤的检测结果也表明,该对引物能特异性的检测到T.basicola基因组DNA的存在。该引物对T.basicola基因组DNA检测的灵敏度为100fg/μL。