【摘 要】
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目的通过噬菌体展示技术构建人源单链抗体库,筛选抗IL-17的特异性抗体并鉴定。方法通过采集35位类风湿关节炎患者的外周血淋巴细胞,提取总RNA,逆转录合成c DNA,PCR扩增人H链
【机 构】
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深圳大学第一附属医院深圳市第二人民医院,中国科学院深圳先进技术研究院抗体药物研究中心,
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目的通过噬菌体展示技术构建人源单链抗体库,筛选抗IL-17的特异性抗体并鉴定。方法通过采集35位类风湿关节炎患者的外周血淋巴细胞,提取总RNA,逆转录合成c DNA,PCR扩增人H链和L链可变区抗体基因。利用SOE-PCR法将VH和VL片段拼接成Sc Fv片段并插入噬菌体载体p CANTAB5E中,构建人源噬菌体单链抗体库。通过固相化的抗原对抗体库进行3轮筛选后,挑取单克隆进行phage-ELISA鉴定,筛选与抗原具有较强结合性的噬菌体克隆。结果成功构建库容为3.5×10~8的噬菌体抗体库,从中筛选到5株阳性克隆,ELISA证实其对抗原IL-17具有较强的结合性及中和活性。结论成功构建了人源噬菌体单链抗体库,从中获得具有抗IL-17的人源Sc Fv抗体片段,为进一步的研究和应用提供实验基础。
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