【摘 要】
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目的:建立大鼠脑组织线粒体的体外蛋白合成体系并对其合成产物进行电泳分离和分子量鉴定.方法:分离大鼠脑组织线粒体,用3H-亮氨酸掺入法探索线粒体体外翻译的最佳条件,35S-蛋
【机 构】
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第三军医大学病理生理教研室,第四军医大学西京医院
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目的:建立大鼠脑组织线粒体的体外蛋白合成体系并对其合成产物进行电泳分离和分子量鉴定.方法:分离大鼠脑组织线粒体,用3H-亮氨酸掺入法探索线粒体体外翻译的最佳条件,35S-蛋氨酸掺入并对翻译后产物经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和放射自显影进行分子量鉴定.结果:分离的线粒体氧化磷酸化偶联程度高,呼吸控制率(RCR)在3.5～5.5之间;体外3H-亮氨酸的掺入活性在60 min内近似线性增长,而后维持在一相对稳定水平;3H-亮氨酸的掺入活性随线粒体蛋白浓度而增加,而单位线粒体蛋白的掺入活性在1 mg/ml时最高;35S-蛋氨酸掺入SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳后可观察到清晰的8条自显影带,分子量分别为(单位Kda)86、66、56、43、33、29、25、18.结论:用此方法建立的脑线粒体离体翻译反应体系具有高活性和翻译忠实性等特点,是研究脑mtDNA在翻译水平的表达及调控的有效方法.
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