肝素亲和柱-高效液相色谱法快速测定乳粉中乳铁蛋白的优化研究

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目的:建立一种肝素亲和柱-高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)快速检测乳粉中乳铁蛋白的分析方法。方法:样品经水溶液超声提取,调节pH,采用50 mmol/L磷酸氢二钠溶液(A)和1 mol/L氯化钠溶液(B)作为流动相进行梯度洗脱,采用HPLC进行测量,检测器采用280 nm波长。结果:乳铁蛋白在上述色谱条件下能完全分离。乳铁蛋白线性范围为5.54~110.9μg/mL,相关系数r=0.999966,方法检出限为12 mg/100g,定量限为28.5 mg/100g;平均回收率97.5%~101.9%,相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)<3.0%。该方法检测结果与酶联免疫吸附法(ELISA)基本一致。结论:该方法操作简便,精密度和回收率高,重复性好,可以用于测定乳粉中乳铁蛋白。
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