目的 探讨激活JAK2信号通路是否能够长期扩增调控造血干祖细胞并评价扩增细胞的定向分化潜能.方法构建克隆1个含有JAK2基因和二聚化化学诱导物(AP20187)结合位点所组成的逆转录病毒载体.AP20187可以使JAK2二聚化激活细胞内信号传导.将该载体转入小鼠原始骨髓造血细胞,在无血清培养基中,将JAK2转基因的细胞分为:①空白对照组,②AP20187组,③细胞因子联合组[干细胞因子(SCF)+Flt3-配体(Flt3-L)],④AP20187+ SCF+ Flt3-L组.对扩增的细胞进行免疫表型、定向分化、造血祖细胞集落分析及脾集落形成单位的研究.结果只有AP20187+SCF+Flt3-L组能够使JAK2转基因的骨髓细胞持续大量对数级增殖.约8 d时,细胞数量可以达到扩增前的1019倍.扩增的细胞经流式细胞仪检测为:Sca1阳性细胞为52%～98%,C-kit阳性率为56%～69%,CD34阳性率40%～85%;而其他表型TER119阳性0～20%,CD41阳性5%～36%,B220阳性12%～46%,Gr1阳性6%～17%,CD11b阳性35%～46%,CD3为阴性.扩增细胞在SCF/粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)/白介素(IL)-3条件下,可分化形成明显的粒细胞和巨噬细胞;在SCF/红细胞生成素(EPO)条件下,可分化为红细胞;在SCF/血小板生成素(TPO)/IL-11条件下,可分化为巨核细胞.祖细胞半固体集落培养,可以形成红系爆式集落形成单位(BFU-E)、粒-巨噬细胞集落形成单位(CFU-GM)、混合集落形成单位(CFU-Mix)以及IL-7产生的B淋巴细胞集落,并可在照射过的小鼠体内形成脾集落形成单位.结论 JAK2介导的转基因骨髓造血细胞可以长期扩增调控,扩增的细胞仅限于JAK2转基因的细胞,并且具有多系分化的潜能。
转导JAK2基因可促进原始多能造血细胞在体外的长期扩增
【摘 要】
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目的 探讨激活JAK2信号通路是否能够长期扩增调控造血干祖细胞并评价扩增细胞的定向分化潜能.方法构建克隆1个含有JAK2基因和二聚化化学诱导物(AP20187)结合位点所组成的逆转录病毒载体.AP20187可以使JAK2二聚化激活细胞内信号传导.将该载体转入小鼠原始骨髓造血细胞,在无血清培养基中,将JAK2转基因的细胞分为:①空白对照组,②AP20187组,③细胞因子联合组[干细胞因子(SCF)+
【机 构】
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100730,北京医院血液科,100730,北京医院血液科,100730,北京医院血液科
【出 处】
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中华医学杂志
【发表日期】
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2004年84期
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