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目的
研究转录因子E盒结合锌指蛋白2(ZEB2)对HBV复制和表达的影响。
方法分别培养HepG2、HepG2.2.15和HepAD38细胞,Western blot检测ZEB2表达水平。培养HepG2.2.15细胞,转染ZEB2表达质粒或针对ZEB2的shRNA,采用Western blot检测ZEB2和HBV核心蛋白表达水平,实时荧光定量PCR检测HBV 3.5 kb RNA和HBV DNA,Southern blot检测HBV复制中间体,酶联免疫吸附法检测HBsAg和HBeAg表达水平,明确ZEB2对HBV复制表达的影响。采用双荧光素酶报告系统检测ZEB2对HBV启动子的影响,染色质免疫共沉淀法检测ZEB2与HBV启动子的结合情况。组间均数比较采用Studentt检验。
结果在HBV复制的细胞中,ZEB2表达受到抑制。过表达ZEB2可使HBV复制和表达水平下降约50%,差异有统计学意义(P<0.05)。采用shZEB2-1和shZEB2-2下调ZEB2后,HBV复制中间体的相对表达量由58.53±3.43分别上升到112.80±5.03、128.30±2.31,HBV 3.5kb RNA的相对表达量由1.00±0.01分别增加到2.03±0.02、2.32±0.03,HBsAg的相对表达量由35.63%±1.57%分别上升到81.87%±0.43%、100.00%±2.18%,HBeAg的相对表达量由37.00%±0.70%分别上升到88.00%±2.60%、100.00%±0.75%。ZEB2可以抑制HBV核心启动子的转录活性,并可与HBV核心启动子结合。
结论ZEB2通过结合HBV核心启动子并抑制其转录活性,从而抑制HBV的复制和表达。