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【目的】营养期杀虫蛋白Vip3A是一种由苏云金芽孢杆菌在对数生长期产生的新型杀虫毒素.Vip3A与敏感昆虫中肠上皮细胞的结合是其发挥杀虫活性的关键步骤.为进一步探究Vip3A毒素的杀虫机理,研究Vip3Aa10与甜菜夜蛾刷状缘膜囊泡(BBMVs)的结合特性.【方法】在大肠杆菌中用IPTG诱导表达Vip3Aa10,用亲和层析和离子交换层析的方法纯化蛋白,并用胰蛋白酶活化Vip3Aa10,得到Vip3Aa10GT.然后分析Vip3Aa10前毒素和Vip3Aa10GT对甜菜夜蛾的杀虫活性,用免疫印迹法和配体印迹法分析Vip3Aa10GT与甜菜夜蛾BBMVs的结合特性以及在甜菜夜蛾BBMVs上的结合蛋白.【结果】Vip3Aa10GT与Vip3Aa10前毒素对甜菜夜蛾的杀虫活性很高.Vip3Aa10GT在p H80时更容易与甜菜夜蛾BBMVs结合,并且能够与非敏感性昆虫黄粉虫BBMVs结合.在相同p H条件下,Vip3Aa10前毒素比Vip3Aa10GT更容易与甜菜夜蛾BBMVs结合.Vip3Aa10GT在甜菜夜蛾BBMVs上有4条结合蛋白,其分子量分别为80、38、31和22k Da.【结论】活化的Vip3Aa10与甜菜夜蛾BBMVs的结合是p H依赖性的,并且能与BBMVs上的4个蛋白结合.