【摘 要】
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本试验旨在探究分离和纯化猪骨骼肌肌内脂滴的方法,为深入揭示肌内脂肪形成的调控机制奠定基础。试验采集体重为(120±2) kg的"杜×长×大"三元杂交猪的背最长肌,采用梯度超
【机 构】
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天津市农业科学院天津市畜牧兽医研究所; 天津大学化工学院; 西北农林科技大学动物科技学院; 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所动物营养学国家重点实验室;
【基金项目】
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国家自然科学基金青年科学基金项目(No.31402097);动物营养国家重点实验室开放基金(7008);天津市生猪产业体系创新团队资助(IT-TPRS2017005);中国博士后科学基金(No.2014M561191)
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本试验旨在探究分离和纯化猪骨骼肌肌内脂滴的方法,为深入揭示肌内脂肪形成的调控机制奠定基础。试验采集体重为(120±2) kg的"杜×长×大"三元杂交猪的背最长肌,采用梯度超速离心法对猪背最长肌肌内脂滴初步超速分离,探索不同组织匀浆方式、缓冲液pH、温度及苯甲基磺酰氟(PMSF)对肌内脂滴初分离的影响,确定高效获取纯化脂滴的最佳离心力及离心时间。使用油红O及Bodipy染色进行肌内脂滴形态学鉴定,通过考马斯亮蓝染色及Western blot技术对脂滴进行纯度检测。结果表明:使用全自动组织研磨仪匀浆猪骨骼肌,在4℃、pH 7.4缓冲液中添加PM SF时分离获得的肌内脂滴形态完整;纯化条件为4℃、230 000×g离心30 min时获得脂滴量最多、形态最好,考马斯亮蓝染色鉴定脂滴蛋白条带丰富清晰,并且Western blot验证纯度最高。本实验室建立了猪骨骼肌肌内脂滴的分离和纯化方法,应用此方法获得了形态完整且纯度较高的肌内脂滴,该技术可为研究肌内脂肪生成和分子调控机制开辟新的途径。
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