新型冠状病毒(2019-nCoV)席卷全球,目前仍处于高发阶段.高灵敏、高准确率的核酸分子诊断技术及方法,成为全球攻关热点.本研究基于微滴式数字PCR检测技术,利用巢式PCR原理,开发了检测试剂,建立了检测方法.对333个新型冠状病毒肺炎临床患者及所在环境样本进行了应用检测,与实时荧光定量PCR(RT-PCR)进行对比分析.本研究建立的微滴式数字PCR方法的线性范围在25～5 copies/μL之间,最低检出限可达0.5 copies/μL,高于市售实时荧光定量PCR检测技术的2～3个数量级.在333例样本中,环境样本197例中检测出7例阳性,人源样本136例中检测出9例阳性,检测准确度可达100％,并且检测出了RT-PCR无法检测的环境中微量病毒残留.本研究建立的数字PCR检测方法具有高度特异性,最低检出限远远低于RT-PCR.对疑似2019-nCoV感染者、早期感染者以及环境中微量病毒灵敏准确检测具有重大意义.