目前抗VEGF药物的应用已广泛用于眼部新生血管性疾病发病的治疗，但有部分患者的疗效并不理想，因此研究VEGF的上游基因缺氧诱导因子-1(HIF-1)及其限速酶脯氨酸羟化酶(PHDs)在新生血管形成中的作用具有重要的临床意义。

探讨外源性PHDs在HIF-1激活通路中的负性调节作用。

用Hela细胞提取RNA，采用逆转录PCR法从cDNA克隆PHD₁、PHD₂和PHD₃，通过限制性内切酶构建pFLAG-PHD₁、pFLAG-PHD₂和pFLAG-PHD₃质粒并通过基因测序进行鉴定。分别将人RPE细胞株(ARPE-19)在体积分数21% O₂(常氧组)、1% O₂(低氧组)和缺氧模拟剂(CoCl₂，缺氧组)条件下进行培养，将pFLAG-PHD₁、pFLAG-PHD₂和pFLAG-PHD₃质粒分别转染至培养的ARPE-19细胞中，pFLAG-CMV2转染作为空白对照。采用Western blot法测定和比较转染细胞在不同氧环境培养下PHD₁、PHD₂和PHD₃蛋白的表达强度；采用双荧光素酶报告系统评估各组细胞中HIF-1的转录活性。

Western blot法检测显示常氧组、低氧组和缺氧组ARPE-19细胞中均有PHD₁、PHD₂和PHD₃蛋白的表达，各组细胞中PHD₂的表达条带均强于PHD₁和PHD₃蛋白，差异均有统计学意义(P<0.05)。pFLAG-CMX转染后常氧组细胞中内源性HIF-1活性反应低，低氧组和缺氧组细胞中HIF-1的转录活性明显升高，与空白对照组相比，pFLAG-PHD₁、pFLAG-PHD₂、pFLAG-PHD₃转染后常氧组细胞中内源性HIF-1活性反应无明显变化(F＝0.48，P>0.05)，而低氧及缺氧组细胞中HIF-1活性明显下降，与空白对照组比较差异均有统计学意义(F＝24.30，112.67，均P<0.05)。相同培养条件下，pFLAG-PHD₂转染后细胞中HIF-1活性明显低于pFLAG-PHD₁和pFLAG-PHD₃转染细胞，差异均有统计学意义(均P<0.05)。

PHDs对人RPE细胞中HIF-1的激活通路有明显的负向调节作用，其对低氧细胞和缺氧细胞中HIF-1转录活性的抑制作用明显强于常氧细胞，其中PHD₂抑制HIF调节通路的作用明显强于PHD₁和PHD₃。